土壤化學(xué)屏障中聯(lián)苯菊酯快速檢測(cè)方法的研究.pdf

1、土壤化學(xué)屏障法(chemical soil barrier)作為一種有效的白蟻防治方法，被廣泛應(yīng)用于我國(guó)新建房屋的白蟻預(yù)防。聯(lián)苯菊酯(bifenthrin)，擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑、殺螨劑，具有殺蟲(chóng)譜廣、高效等特點(diǎn)，對(duì)白蟻有強(qiáng)烈的趨避及毒殺作用，是我國(guó)乃至世界最常使用的白蟻防治藥劑之一。目前，雖有利用氣相色譜(GC)、高效液相色譜(HPLC)等儀器檢測(cè)聯(lián)苯菊酯的方法見(jiàn)諸報(bào)道，但儀器方法使用成本昂貴且難以在實(shí)驗(yàn)室外的其他條件下應(yīng)用與普及。為達(dá)

2、到現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)聯(lián)苯菊酯的目的，本研究制備了抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體并建立了ic-ELISA方法和膠體金免疫層析試紙條，為土壤化學(xué)屏障中聯(lián)苯菊酯的快速檢測(cè)提供了可靠依據(jù)。
　　本研究分別以聯(lián)苯菊酸、聯(lián)苯醇、聯(lián)苯菊酯為原料合成半抗原GFd、LBc和LBs。采用活潑酯法將上述3種半抗原分別與牛血清蛋白(BSA)偶聯(lián)制備免疫原。采用混合酸酐法將包括LBy在內(nèi)的4種半抗原分別與卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)制備包被原。利用紫外波長(zhǎng)掃描法證實(shí)半抗原偶聯(lián)成

3、功，并測(cè)定了7種人工抗原的偶聯(lián)結(jié)合比。通過(guò)免疫BALB/c小鼠、測(cè)定小鼠血清效價(jià)及細(xì)胞融合，篩選到一株能穩(wěn)定分泌抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為3D4。經(jīng)測(cè)定，細(xì)胞株3D4分泌的單克隆抗體為IgG1型，輕鏈為kappa鏈。
　　利用制備的單克隆抗體建立了聯(lián)苯菊酯ic-ELISA方法，并對(duì)抗原抗體和包被原的工作濃度、封閉物以及工作緩沖液等條件進(jìn)行了優(yōu)化。在最優(yōu)條件下，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性方程為B/Bo(％)=-0.3510L

4、ogC+0.0454，R2=0.9903，檢測(cè)范圍為0.004-0.7mg/L，IC50為0.05 mg/L，IC10為0.004 mg/L?？贵w與其他聯(lián)苯菊酯結(jié)構(gòu)類(lèi)似物的交叉反應(yīng)率均小于0.7％，表明抗體對(duì)聯(lián)苯菊酯具有較高的特異性。在黑土、黃土、紅土中分別添加2-10 mg/kg的聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液，測(cè)得的平均回收率為83.5-104.7％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.8-13.6％。利用建立的ic-ELISA方法對(duì)黃土真實(shí)樣品中聯(lián)苯菊酯含量進(jìn)

5、行檢測(cè)，并與氣相色譜的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，得到相關(guān)性方程為y=1.0275x-0.2038，R2=0.9704，證明本研究建立的ic-ELISA方法具有較高的可靠性與準(zhǔn)確性，可用于土壤化學(xué)屏障中聯(lián)苯菊酯的檢測(cè)。
　　本研究制備了膠體金免疫層析試紙條，并對(duì)人工抗原、NC膜、膠體金顆粒、試紙條參數(shù)及工作溶液（鹽離子強(qiáng)度、PEG20000含量、甲醇含量、pH值等）進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，在最優(yōu)條件下，試紙條對(duì)聯(lián)苯菊酯的完全抑制濃度為60 m