慶大霉素可視化免疫快速檢測(cè)方法的研究.pdf

1、分類號(hào)：TS201，6密級(jí)：(秘密、機(jī)密、絕密)學(xué)校代碼：10057研究生學(xué)號(hào)：09811512慶大霉素可視化免疫快速檢測(cè)方法的研究StudyontheVisualImmunoassayforRapidDetectionofGentamicin專業(yè)名稱：農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程(農(nóng))指導(dǎo)教師：王俊平教授研究生姓名：徐小婧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：農(nóng)學(xué)碩士論文提交只期：2012年3月論文課題來(lái)源：自選課題學(xué)位授予單位：天津科技大學(xué)摘要本論文對(duì)慶大霉素的可

2、視化免疫快速檢測(cè)方法進(jìn)行了系統(tǒng)研究，分別采用免疫層析試紙條及免疫親和柱的檢測(cè)方法檢測(cè)動(dòng)物源性慶大霉素殘留。采用20nm的膠體金標(biāo)記慶大霉素多克隆抗體，戊二醛二步法偶聯(lián)卵清蛋白制成慶大霉素包被抗原，采用檸檬酸三鈉還原法制備粒徑為20nm膠體金，經(jīng)過(guò)一系列優(yōu)化，最終確定膠體金標(biāo)記抗體最適pH為85，最佳抗體標(biāo)記量為25燼。根據(jù)最優(yōu)條件成功制得膠體金標(biāo)記抗體。以硝酸纖維素膜為固相載體，以包被抗原和羊抗兔二抗分別作為檢測(cè)線和控制線，金標(biāo)記抗體噴

3、涂在玻璃纖維素墊上，制得快速檢測(cè)慶大霉素免疫層析試紙條。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化建立的慶大霉素膠體金免疫層析方法操作簡(jiǎn)便、快速，10min內(nèi)即可得到檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)限為25g，L；同時(shí)與同類獸藥及其他族常用獸藥均無(wú)交叉，有良好的特異性。選取牛奶、牛肉、豬肉、豬肝、豬腎、雞肉、魚肉、雞蛋作為檢測(cè)樣品。所有樣品不需要有機(jī)溶劑前處理，添加三個(gè)不同濃度的慶大霉素，經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的處理即可上樣檢測(cè)，并得到與標(biāo)準(zhǔn)溶液梯度檢測(cè)近似的結(jié)果。方法在牛奶中檢出限為100pg／L

4、，牛肉、豬肉中檢出限為501ag／kg，在其它樣品中檢出限為10099／kg，均低于最高殘留限量。與酶聯(lián)免疫分析方法的一致性較好。試紙條在4。C下密封干燥條件下至少可保存2個(gè)月。所研制的試紙條無(wú)需任何檢測(cè)儀器，操作快速，準(zhǔn)確，適用于動(dòng)物源性食品中慶大霉素殘留的現(xiàn)場(chǎng)大量篩選。本研究采用溴化氰活化的瓊脂糖凝膠作為固相載體分別偶聯(lián)了抗慶大霉素多克隆抗體及抗HRP多克隆抗體作為檢測(cè)層和對(duì)照層組裝成的免疫親和檢測(cè)柱，所建立的方法檢測(cè)限為10rtg