芐嘧磺隆單克隆抗體的制備及應(yīng)用初探.pdf

1、隨著科技水平的日益提高，使用農(nóng)藥已成為保障農(nóng)業(yè)生產(chǎn)不可缺少的環(huán)節(jié)。農(nóng)藥通過(guò)對(duì)有害生物的防治和提高農(nóng)副產(chǎn)品的產(chǎn)量、質(zhì)量來(lái)改善人們的生活。目前，我國(guó)已經(jīng)成為世界上第二大農(nóng)藥使用國(guó)，年消耗量估計(jì)在30萬(wàn)噸以上。近年來(lái)，由于有害生物抗藥性的增強(qiáng)，使用農(nóng)藥的濃度和次數(shù)不斷增加，導(dǎo)致有害物質(zhì)大量殘留在環(huán)境中，并通過(guò)食物鏈擴(kuò)大污染，影響環(huán)境生態(tài)平衡。農(nóng)藥在人體內(nèi)的積累和富集，能夠引發(fā)各種疾病，直接影響到人類(lèi)的健康。由農(nóng)藥殘留引發(fā)的問(wèn)題已經(jīng)引起人們的高

2、度重視。因此，建立一套簡(jiǎn)便、快速、靈敏的檢測(cè)方法勢(shì)在必行。
　　 目前，芐嘧磺隆(BSM)是農(nóng)民使用最多的一種稻田除草劑。但是，長(zhǎng)期大量地使用勢(shì)必會(huì)導(dǎo)致該除草劑在環(huán)境中產(chǎn)生殘留，危害整個(gè)生態(tài)系統(tǒng)的安全。因此對(duì)該除草劑進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)是很有必要的。
　　 目前，檢測(cè)芐嘧磺隆殘留量的方法為傳統(tǒng)的色譜法。雖然，色譜法較靈敏、準(zhǔn)確，但是這種方法耗時(shí)長(zhǎng)、檢測(cè)程序繁瑣、費(fèi)用較高。而免疫學(xué)方法中的ELISA技術(shù)(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù))卻彌

3、補(bǔ)了色譜法的缺點(diǎn)，它不但簡(jiǎn)便、快速、靈敏，而且可以大批量地檢測(cè)樣本。因此，該技術(shù)越來(lái)越多地被用于檢測(cè)環(huán)境中的農(nóng)藥殘留量。
　　 在本研究中，選擇戊二醛作為偶聯(lián)劑制備了芐嘧磺隆人工交聯(lián)抗原BSM—OVA，經(jīng)不同的方法鑒定抗原制備成功后，免疫BALB/c小鼠。第五次免疫后7天，測(cè)定小鼠的血清效價(jià)達(dá)到了1：1．28×105，IC50值為0．032μg·mL—1。采用PEG介導(dǎo)法將免疫后小鼠的脾臟細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。經(jīng)過(guò)

4、篩選，得到一株芐嘧磺隆單克隆抗體陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株，編號(hào)為2H1，分泌的抗體類(lèi)型為IgG2b。采用體內(nèi)誘生腹水法和辛酸—飽和硫酸銨法大量制備并純化了芐嘧磺隆單克隆抗體。采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法測(cè)定了抗體的最佳工作條件，建立了利用單克隆抗體檢測(cè)芐嘧磺隆殘留量的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，制作了檢測(cè)該除草劑的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到回歸方程y=13．816x+34．753，檢測(cè)范圍為1～1883ng·mL—1，最低檢測(cè)限0．2ng·mL

5、—1。芐嘧磺隆以濃度10—1～103ng·mL—1在東湖水樣中添加，測(cè)得回收率為96．53％～107．2％，變異系數(shù)(CV)為3．711％～8．637％，數(shù)據(jù)表明該方法具有較高的精確度和靈敏度。利用該方法檢測(cè)了某些糧谷類(lèi)農(nóng)作物樣本中芐嘧磺隆的農(nóng)藥殘留量，發(fā)現(xiàn)了部分樣本中存在該除草劑的殘留。
　　 本研究探索了一條利用免疫學(xué)方法檢測(cè)芐嘧磺隆殘留量的新途徑，且與傳統(tǒng)方法相比最大的特點(diǎn)快速、靈敏、可批量檢測(cè)樣本，在環(huán)境實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)方面具有