新鮮煙葉中的酚類物質(zhì)研究.pdf

1、建立了煙葉中25種酚類物質(zhì)的高效液相色譜-紫外/質(zhì)譜(HPLC-UV/MS)聯(lián)合測定方法，其中11種主要酚類物質(zhì)采用HPLC-UV法進行內(nèi)標標準曲線法絕對定量分析，其余酚類物質(zhì)采用HPLC-MS法進行內(nèi)標校正半定量分析。HPLC-UV法以Symmetry C18色譜柱為固定相，流動相A為水/甲醇/乙酸(44/5/1，v/v/v)，B為甲醇/水/乙酸(44/5/1，v/v/v)，梯度洗脫，紫外檢測波長為340 nm; HPLC-MS法以A

2、gilent SB-AQ色譜柱為固定相，流動相A為0.1％乙酸水，B為乙腈，梯度洗脫，采用電噴霧電離四級桿飛行時間質(zhì)譜(ESI-Q-TOF)進行定性定量。方法驗證結果表明:11種酚類標準物質(zhì)在0.90～99.00μg/mL的范圍內(nèi)（綠原酸及蕓香苷為0.95～380.00μg/mL）的線性相關系數(shù)在0.9993～0.9999之間。在22.5～24.8、45.0～49.5、67.5～74.3μg/mL3個水平的加標回收率為91.0％～112

3、.4％。方法重復性的相對標準偏差在1.48％～13.40％之間，日內(nèi)日間精密度的相對標準偏差為0.35‰15.54％。本方法已應用于批量煙葉樣品檢測。
　　利用軟件SIMCA-P11.5及SPSS16.0對濃香型、清香型、中間香型94份成熟期新鮮煙葉樣品中的酚類物質(zhì)進行了數(shù)據(jù)分析，偏最小二乘判別分析(PLS-DA)結果表明三種香型間有明顯的分離趨勢，其中濃香型與中間香型較接近，清香型獨立分為一類;分層聚類(HCA)也得到相同的結果

4、。兩兩香型通過非參數(shù)檢驗(p＜0.05)結合PLS-DA模型的分類貢獻值(VIP＞1)得到不同香型間12種酚類差異代謝物。另外將酚類物質(zhì)與各地的生育期氣候條件做相關性分析，發(fā)現(xiàn)莨菪苷、蕓香苷及蕓香苷Ⅱ、山奈酚苷及山奈酚苷Ⅱ與生育期氣候顯著相關(Pearson相關系數(shù)r＞0.6)。
　　研究了貴州、云南、河南的紅大、K326、中煙100三個品種不同生長階段的197份新鮮煙葉樣品中的酚類物質(zhì)。討論了遺傳、環(huán)境、遺傳與環(huán)境互作對酚類物質(zhì)

5、代謝累積的影響。由PLS-DA得分圖及酚類物質(zhì)含量隨生育期變化曲線看出，同一產(chǎn)地不同品種間酚類物質(zhì)生育期累積有所不同，同一品種不同產(chǎn)地間的差異更大，說明環(huán)境因素對酚類物質(zhì)累積的影響大于遺傳因素。
　　建立了一種酚類物質(zhì)用于代謝組學研究中的新鮮煙葉樣品質(zhì)量判別方法。將蕓香苷與山奈酚苷含量的比值作為區(qū)分代謝組學合格樣品、變質(zhì)的不合格樣品及部分變質(zhì)的不合格樣品的標準，即待測樣品中蕓香苷與山奈酚苷含量的比值在6.4及以上的為合格樣品，可用