產(chǎn)核黃素枯草芽孢桿菌代謝物組的初步研究.pdf

1、本文通過比較優(yōu)化，建立了利用LC-MS分析手段進行產(chǎn)核黃素Bacillussubtilis代謝物組學研究的方法。比較發(fā)現(xiàn)，冷甲醇(60％)滅活方法應用于實驗所研究菌種時，有一定程度的胞內(nèi)代謝物泄露現(xiàn)象，而采用快速過濾的方法收集菌體則克服了這一缺點。此外，本文還比較了三種不同的提取方法，通過比較檢測結果，確定了乙腈：甲醇：水提取方法和甲醇：氯仿提取方法聯(lián)合使用更適合于本研究。最終確定了采用快速過濾的方法收集菌體，乙腈：甲醇：水和甲醇：氯仿

2、方法聯(lián)合使用提取胞內(nèi)代謝物，液質(zhì)聯(lián)用儀檢測的代謝物組學研究方法。
　　 將建立的代謝物組學研究方法應用于四種不同的產(chǎn)核黃素工程菌，對其胞內(nèi)代謝物的正、負離子ESI-MS數(shù)據(jù)進行PCA分析，初步確定了16種主要差異代謝物，并根據(jù)代謝物輪廓分析對比研究不同基因型菌種代謝差異的因為。通過對四種不同產(chǎn)核黃素工程菌胞內(nèi)代謝物的檢測發(fā)現(xiàn)：
　　 與B.subtilis RH33相比，B.subtilis RH33-SVZ、B.sub

3、tilis RH33-SVG以及B.subtilis RH33-VGZ中的5-磷酸核酮糖、6，7-二甲基-8-核糖醇基-2，4-二氧四氫蝶啶、核黃素均有不同程度的顯著提高，而丙酮酸、檸檬酸、琥珀酸、蘋果酸、草酰乙酸等都有不同程度的降低。說明了通過擴增磷酸戊糖途徑中的關鍵基因zwf以及gnd可以有效地增加其通量，降低三羧酸循環(huán)流量，改變糖酵解途徑和磷酸戊糖途徑代謝流量的分布，從而有助于核黃素產(chǎn)量的提高。
　　 同時，由于磷酸戊糖途