煙堿類農(nóng)藥烯啶蟲胺酶聯(lián)免疫檢測方法的建立.pdf

1、本論文對煙堿類農(nóng)藥烯啶蟲胺殘留的間接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法(icELISA)進行了系統(tǒng)的研究。
　　本實驗以烯啶蟲胺為原料，用3-巰基丙酸Cl原子取代，從而引入羧基活性基團，成功制備了半抗原。采用活化酯法將半抗原分別與牛血清蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)制備免疫原和包被原，免疫原免疫大耳白兔以后，成功獲得了特異性抗烯啶蟲胺的多克隆抗體。
　　通過優(yōu)化方法工作條件，建立了一種簡便、快捷、靈敏的煙堿類農(nóng)藥烯啶蟲胺的間接競

2、爭酶聯(lián)免疫檢測方法(icELISA)。間接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法中包被原的包被濃度為0.05μg/well，抗體的稀釋度為1∶2000，緩沖液為濃度為0.05molL-1的PBS，封閉液為0.5％脫脂乳粉/PBS。此方法的靈敏度(IC50值)為2.18±0.22ngmL-1，檢測限（LOD，以IC15計算）為0.20±0.02ngmL-1。烯啶蟲胺抗體具有良好的特異性，與煙堿類農(nóng)藥吡蟲啉、啶蟲脒、噻蟲啉的交叉反應(yīng)率分別是1.49％、0.2

3、7％和0.28％，而與其他種類的農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率均低于0.01％。選取4種水樣（純凈水、自來水、井水、河水），4種果汁（番茄汁，蘋果汁，橙汁，葡萄汁），3種蔬菜（番茄，黃瓜，卷心菜）作為樣品，進行了烯啶蟲胺的添加回收實驗，烯啶蟲胺的回收率在62.8％～116.5％之間，板內(nèi)變異系數(shù)為0.9％～9.9％，板間變異系數(shù)為1.7％～9.9％。ELISA的檢測結(jié)果與氣相色譜分析法(GC)的檢測結(jié)果有很好的相關(guān)性，兩種檢測方法檢測結(jié)果的線性回歸方