肉桂醛和肉桂酸生物降解及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物跟蹤分析.pdf

1、本文開展了肉桂醛和肉桂酸生物降解及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物跟蹤分析，在建立了復(fù)雜生物反應(yīng)體系的定性定量分析方法的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了以肉桂醛、肉桂酸為底物的菌種篩選和轉(zhuǎn)化等方面的研究，取得的研究成果如下： (1)利用反相高效液相色譜法建立了可同時分析苯乙酮和肉桂酸的分析方法，確定色譜條件為：流動相為甲醇：水：冰醋酸=55：45：0.05；檢測波長為246nm,流速為1.0mL·min-1。在最佳實驗條件下，得到苯乙酮、肉桂酸的線性方程分別為：Y=3

2、2017X-6298.6；Y=11286X-4508.7并進(jìn)行了精密度實驗和回收率實驗。 (2)研究了肉桂醛、苯甲醛和苯甲酸的紫外吸收光譜特征，建立了三組分紫外分光光度法測定含量的方法，結(jié)果表明，肉桂醛和苯甲醛在228nm和256nm波長處有兩個等吸收點，利用等吸收點構(gòu)建了簡單、快速的混合物定量分析方法，給出了各組分濃度與吸光度之間的關(guān)系，分別為C肉桂醛=(A311-0.0084)/0.0424；C苯甲醛=(A256-0.000

3、5)/0.0622-C肉桂醛；C苯甲酸=(A228+0.0057)/0.0611-C肉桂醛-C苯甲醛。其中肉桂醛的線性范圍：0-18.03μg·mL-1，苯甲醛的線性范圍：O-13.08μg·mL-1，苯甲酸的線性范圍：0-9.233μg·mL-1。其方法精密度的RSD均<1％，穩(wěn)定性的RSD均<1％。用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行回收試驗，測定樣品回收率均在99％．101％之間。 (3)實驗所用部分土樣分別在高峰林場、高峰桂油廠、玉林平南采

4、集，共122份土樣，進(jìn)行了菌種的分離和轉(zhuǎn)化肉桂醛為苯甲醛的能力實驗，篩選出186株單一菌，其中有轉(zhuǎn)化能力的6株，從中選取轉(zhuǎn)化能力相對較高的一株菌(菌種5＃)，進(jìn)行了轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化實驗。對轉(zhuǎn)化能力較高的5＃菌種進(jìn)行了碳源、氮源、溫度、發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH、裝液量等條件的優(yōu)化。結(jié)果顯示，以葡萄糖為碳源、牛肉膏為氮源、溫度保持在30℃，初始pH為5．0，裝液量為100mL時為最佳轉(zhuǎn)化條件，苯甲醛的含量可達(dá)5．24％。 (4)篩選到一株高轉(zhuǎn)

5、化能力的菌株，它能高效、高選擇性的將肉桂酸降解為苯乙酮。經(jīng)鑒定出該菌為伯克霍爾德氏菌屬的越南伯克氏菌(Burkholderiavietnamiensis)。 (5)對越南伯克氏菌轉(zhuǎn)化肉桂酸生成苯乙酮的反應(yīng)，進(jìn)行了優(yōu)化轉(zhuǎn)化研究，優(yōu)化條件為：以蔗糖為碳源，濃度為2g·L-1，蛋白胨為氮源，濃度為2.5g·L-1，30℃，發(fā)酵2.5d，轉(zhuǎn)化2d，轉(zhuǎn)化過程中pH為9.0．在最佳轉(zhuǎn)化條件下，轉(zhuǎn)化0.5g肉桂酸底物后，苯乙酮的含量可達(dá)3.2