魚(yú)露中章魚(yú)胺的分離及其生物合成的研究.pdf

1、章魚(yú)胺（Octopamine）是一種重要的生物胺和神經(jīng)介質(zhì)，起廣泛的生理作用，有調(diào)節(jié)代謝與能量平衡的功效，是目前唯一商品化的防治肥胖癥與糖尿病的β3-腎上腺素能受體激動(dòng)劑。枳實(shí)和魚(yú)露是天然章魚(yú)胺的主要來(lái)源，但枳實(shí)中章魚(yú)胺的含量?jī)H為0．01～0．03％。而魚(yú)露中相對(duì)豐富的章魚(yú)胺的含量，使從魚(yú)露中提取章魚(yú)胺開(kāi)發(fā)健康產(chǎn)品成為可能。本論文研究之一是從魚(yú)露中提取章魚(yú)胺的有效方法并使處理過(guò)的魚(yú)露有望成為適合更廣大人群的新的調(diào)味料，為進(jìn)一步改進(jìn)魚(yú)露的

2、生產(chǎn)工藝與開(kāi)發(fā)利用魚(yú)露打下了基礎(chǔ)。研究之二是模擬魚(yú)露中章魚(yú)胺的生成路徑，以酪胺為前體化合物，經(jīng)細(xì)胞色素P450酶系的羥化作用，生物合成章魚(yú)胺，從而為章魚(yú)胺的工業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1．魚(yú)露中章魚(yú)胺的分離 魚(yú)露含鹽量達(dá)27％，章魚(yú)胺是以有機(jī)酸鹽的形式存在于魚(yú)露。實(shí)驗(yàn)初期建立起快速準(zhǔn)確測(cè)定章魚(yú)胺的含量方法-HPLC方法。通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以章魚(yú)胺的進(jìn)樣濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，其回歸方程為：Y=286

3、8．4X+60．619，r=0．9991．結(jié)果表明：章魚(yú)胺在0．0057-50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。接著采用靜態(tài)吸附和動(dòng)態(tài)吸附相結(jié)合的方法，綜合考慮吸附量、解吸率等因素，研究樹(shù)脂分離提取魚(yú)露中章魚(yú)胺的吸附性能和洗脫參數(shù)。結(jié)果表明：H103大孔吸附樹(shù)脂對(duì)魚(yú)露中章魚(yú)胺有較好的吸附分離效果，該樹(shù)脂對(duì)魚(yú)露中章魚(yú)胺的靜態(tài)飽和吸附量達(dá)2．925mg·g-1（干樹(shù)脂），30％的乙醇為最佳洗脫劑，洗脫率達(dá)98．04％。H103大孔吸附樹(shù)

4、脂處理后，能有效分離章魚(yú)胺，改善了魚(yú)露的風(fēng)味，適用于從魚(yú)露中提取章魚(yú)胺的工業(yè)應(yīng)用。 2．章魚(yú)胺的生物合成 魚(yú)露在漫長(zhǎng)的發(fā)酵過(guò)程中，細(xì)胞色素P450酶系（cytochrome P450s，CYP450）對(duì)章魚(yú)胺的生物合成起了關(guān)鍵的作用。參照魚(yú)露中章魚(yú)胺的生成路徑，以酪胺為前體化合物，經(jīng)細(xì)胞色素P450酶系的催化羥化，轉(zhuǎn)化為章魚(yú)胺。細(xì)胞色素P450酶系催化作用的重要場(chǎng)所——肝臟，本論文采用改良的Omura法制備新鮮魚(yú)肝制劑，

5、減少肝臟里CYP450的失活率。CYP450的來(lái)源設(shè)計(jì)了三種方案，一是新鮮魚(yú)肝經(jīng)均質(zhì)后的肝勻漿，二是肝勻漿再經(jīng)高速離心和過(guò)濾后而得的S-9部分，第三是在S-9中再添加維生素C。三種方案后催化羥化產(chǎn)物經(jīng)HPLC進(jìn)行檢測(cè)分析（章魚(yú)胺為內(nèi)標(biāo)），以轉(zhuǎn)化后章魚(yú)胺的峰面積情況為指標(biāo)，優(yōu)化出最佳生物合成方案。結(jié)果表明：酪胺用肝勻漿和S-9生物轉(zhuǎn)化章魚(yú)胺后，HPLC圖譜顯示章魚(yú)胺的峰面積很小，有并肩峰，且雜峰干擾大。隨著轉(zhuǎn)化時(shí)間延長(zhǎng)，三小時(shí)后產(chǎn)物比一小

6、時(shí)更多，且章魚(yú)胺的峰面積減少，有分解趨勢(shì)。S-9與維生素C耦合作用一小時(shí)后，HPLC圖譜顯示酪胺轉(zhuǎn)化成章魚(yú)胺的峰面積最多，無(wú)并肩峰，雜峰干擾很小，生物合成效果最好。三小時(shí)后章魚(yú)胺的峰面積減少，也有分解的趨勢(shì)，且其他產(chǎn)物增多，有雜峰干擾，這對(duì)今后分離造成困難。 由于國(guó)內(nèi)目前尚未有β3-腎上腺素能受體激動(dòng)劑——章魚(yú)胺的研究報(bào)告或產(chǎn)品，本課題很有可能是第一個(gè)國(guó)內(nèi)有關(guān)天然β3-腎上腺素能受體激動(dòng)劑的生產(chǎn)和應(yīng)用研究的課題。魚(yú)露在中國(guó)的東南