以硅膠為載體的蛋白質(zhì)分子印跡的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)印跡是制備對(duì)模板蛋白具有特異選擇性功能的分子印跡技術(shù)。因其本身性能的限制，進(jìn)展相對(duì)緩慢，技術(shù)尚不成熟，仍需要改進(jìn)常規(guī)的制備和分析方法來(lái)適應(yīng)生物模板的物理性質(zhì)(模板蛋白大小，相容性、構(gòu)象靈活性、水溶性)，以及其穩(wěn)定性，選擇性，位點(diǎn)可接近性，和成本效率等方面的缺點(diǎn)。
　　 本論文主要對(duì)硅膠表面蛋白質(zhì)分子印跡的制備及識(shí)別性能進(jìn)行了深入的研究，考察了聚合物的吸附性質(zhì)與識(shí)別選擇性，并對(duì)分子印跡技術(shù)在蛋白質(zhì)分離和富集領(lǐng)域的應(yīng)用作了初步

2、探討。本論文共六個(gè)章節(jié)，工作可歸納為以下四個(gè)主要部分：
　　 一、綜述了蛋白質(zhì)分子印跡的研究現(xiàn)狀及發(fā)展前景，以及本論文工作的意義。
　　 二、在第二、三章中，采用紫外光譜法從分子水平考察了摩爾比、溶液pH值、離子強(qiáng)度對(duì)功能單體與模板蛋白之間相互作用的影響。并在最佳條件下，選擇硅膠作為固體致孔劑，采用本體聚合法制備了以溶菌酶、牛血紅蛋白為模板蛋白的聚丙烯酰胺印跡凝膠聚合物。競(jìng)爭(zhēng)性吸附實(shí)驗(yàn)表明，硅膠作為致孔劑提高了分子印跡聚

3、合物對(duì)模板蛋白的識(shí)別特異性；同時(shí)也顯著地增加了分子印跡聚合物對(duì)模板蛋白的吸附容量。說(shuō)明加入具有大孔和較大比表面積的致孔劑作為犧牲載體是提高凝膠聚合物的吸附容量和吸附選擇性的有效途徑。
　　 三、在第四章中，采用水解縮聚法，制備了一種新型的無(wú)機(jī).有機(jī)雜化分子印跡聚合物；這種方法兼具硅烷試劑的水解縮聚的簡(jiǎn)便，和殼聚糖作為有機(jī)體生物兼容性良好的優(yōu)點(diǎn)；即具有易制備，親和性能高和低溶脹性等特點(diǎn)。吸附實(shí)驗(yàn)表明，雜化印跡聚合物對(duì)牛血紅蛋白有良

4、好的吸附容量和特異性。即使在蛋白質(zhì)的混合溶液中，具有特異性吸附的分子印跡作用始終對(duì)模板蛋白起著重要作用。
　　 四、在第五、六章中，采用不同的方法對(duì)硅膠表面進(jìn)行修飾，使硅膠具有良好的生物兼容性，并能有效的固定化模板蛋白；然后在其表面形成具有識(shí)別蛋白質(zhì)功能的聚合物薄膜。第五章的修飾過(guò)程為選用γ-(2，3-環(huán)氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷試劑對(duì)其表面進(jìn)行修飾，環(huán)氧基團(tuán)開(kāi)環(huán)后再結(jié)合能固定化蛋白質(zhì)馬來(lái)酸酐分子。因其又帶有乙烯基，可與功能單體.

5、丙烯酰胺共聚，使分子印跡聚合物薄層與載體之間結(jié)合牢固。在第六章中同樣用環(huán)氧基團(tuán)修飾硅膠表面，環(huán)氧開(kāi)環(huán)后與殼聚糖反應(yīng)，在硅膠表面引入生物兼容性良好的殼聚糖，并用雙官能團(tuán)試劑-戊二醛將模板蛋白與殼聚糖偶聯(lián)，共價(jià)固定模板蛋白。硅膠表面修飾法避免了研磨篩分等繁瑣的程序，又能根據(jù)需要選擇合適的尺寸，適合作為色譜固定相。同時(shí)，考察了蛋白質(zhì)印跡聚合物對(duì)模板蛋白以及其非模板蛋白的吸附選擇性，探討了分子印跡聚合物對(duì)模板蛋白的識(shí)別機(jī)理；用其分離蛋白質(zhì)混合溶