藜蘆植物中生物堿的提取純化及抑菌活性研究.pdf

1、藜蘆是百合科藜蘆屬植物，我國早在古代就有對藜蘆進(jìn)行過研究，本草綱目，蜀本草等都有對藜蘆中藥入藥的記載。外國有報道是在二十世紀(jì)中期，美國達(dá)荷州當(dāng)?shù)啬撩癜l(fā)現(xiàn)自己放養(yǎng)的羊羔出生的畸形率高于其他地區(qū)，且表現(xiàn)的畸形現(xiàn)狀是頭部單眼。后來美國有毒植物研究學(xué)家Keeler對這種畸形現(xiàn)狀進(jìn)行了長期的研究，并于1964年確認(rèn)藜蘆屬中甾體生物堿是導(dǎo)致羊羔單眼畸形的主要成分。后來對其生物堿進(jìn)行了深入的研究，并發(fā)現(xiàn)其具有降血壓、降血脂、抗血栓、抗癌等活性，國內(nèi)外

2、已經(jīng)對藜蘆生物堿的這些活性進(jìn)行深入的研究，特別在抗癌領(lǐng)域的研究最為熱門。我國含有豐富的藜蘆屬植物，系統(tǒng)的分離純化出藜蘆中的各種單一生物堿，具有較廣闊的應(yīng)用前景。
　　 本文對藜蘆中的藜蘆生物堿進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，目的是充分利用我國這一豐富的藥材資源，為開發(fā)我國獨(dú)有的知識產(chǎn)權(quán)的中醫(yī)藥產(chǎn)品提供科學(xué)依據(jù)。本文從藜蘆中提取分離純化出純度較高藜蘆胺和介芬胺，并且利用高效液相色譜法發(fā)現(xiàn)此藜蘆中含有抗癌活性成分環(huán)杷胺的存在，運(yùn)用響應(yīng)面法優(yōu)化

3、藜蘆胺和介芬胺的提取條件，高效液相色譜法分析各成分在藜蘆中含量的測定，最后對純化出來的兩種物質(zhì)進(jìn)行了抑菌活性研究。主要研究的內(nèi)容和實驗結(jié)果如下:
　　 (1)對藜蘆的化學(xué)成分進(jìn)行提取、純化和分析。在堿性條件下用乙醇提取，正己烷/乙酸乙酯(v/v=7/3)萃取濃縮液，運(yùn)用高效液相色譜分析萃取液。液相色譜條件為:色譜柱waters symmetry C18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動相乙腈:0.05％甲酸=20/80-

4、35/6512min流速:1.0mL·min-1;檢測波長:215nm;柱溫:30℃。發(fā)現(xiàn)藜蘆植物中有環(huán)杷明的存在，萃取液經(jīng)過硅膠色譜法分離純化后，分別用己烷∶丙酮（0.5％三乙胺）(v∶v=7∶3)和己烷∶丙酮(0.5％)(v∶v=1∶1)洗脫，析出兩種白色固體。運(yùn)用高效液相色譜-紫外及質(zhì)譜，核磁方法，檢測并鑒定出析出的兩種白色固體分別是藜蘆胺和介芬堿。
　　 (2)分離純化得到的純度較高的藜蘆胺和介芬堿配成五個不同的梯度濃度

5、分別是4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL，運(yùn)用高效液相譜作兩個標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后提取三次分別得到藜蘆胺和介芬胺的峰面積，從而計算出藜蘆胺和介芬胺的含量。結(jié)果得到藜蘆中藜蘆胺和介芬胺的含量分別是0.2856％和0.429％。
　　 (3)為了優(yōu)化藜蘆胺和介芬胺的提取工藝，采用響應(yīng)面法優(yōu)化提取時間、提取溫度和料液比，分析并建立數(shù)學(xué)模型。本文就藜蘆植物中藜蘆胺和介芬胺進(jìn)行了提取優(yōu)化，在單因素實驗

6、基礎(chǔ)上結(jié)合響應(yīng)面法對影響藜蘆胺和介芬胺提取量的主要因素進(jìn)行分析，從而得到最佳提取條件。藜蘆胺最佳提取條件是時間2.h，提取溫度75℃，料液比1∶9（g/mL），在此優(yōu)化條件下，20.0g干燥藜蘆根提取得到藜蘆胺的量為98.23mg，與模型預(yù)測值得比較誤差為2.66％。介芬胺最佳提取條件為提取時間為3.5h，溫度為45.0℃，料液比1∶9（g/mL）時，實際提取量為20g藜蘆干燥根得到58.23mg，與模型預(yù)測值得比較誤差為3.05％。<

7、br>　　 (4)本文用濾紙片法，對藜蘆胺和介芬胺兩種化合物的抑菌活性進(jìn)行了研究。選用的菌種分別是枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、白曲霉菌和金黃色葡萄球菌。通過比較五個不同濃度分別為20mg/mL、10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL藜蘆胺和介芬胺對四種菌的抑菌圈大小得到抑菌程度。結(jié)果表明一定濃度的藜蘆胺對四種菌均有不同程度的抑菌能力，其中對白曲霉菌的抑菌最為顯著，2.5mg/mL時抑菌效果明顯。對大腸桿菌在10