發(fā)酵法制備高活性大豆異黃酮的研究.pdf

1、大豆異黃酮作為一種功能性食品和藥品，是目前世界上研究熱點(diǎn)，大豆胚芽是大豆加工中的副產(chǎn)物，富含大豆異黃酮，是一種未被利用的資源。本文立足于廢棄物的再利用，通過黑曲霉發(fā)酵法來制備高活性的大豆異黃酮。對(duì)大豆異黃酮苷元的定性和定量分析、黑曲霉種子培養(yǎng)基成分的確定、大豆異黃酮苷元固態(tài)發(fā)酵的工藝和發(fā)酵胚芽基質(zhì)中大豆異黃酮苷元的提取工藝進(jìn)行了深入的探討和研究。 首先研究了大豆異黃酮苷元的定性和定量的方法。通過大豆異黃酮類化合物的特征顏色反應(yīng)，

2、建立了一套快速有效的鑒定大豆異黃酮類化合物及其不同單體的方法。采用硅膠GF254薄層色譜法分離鑒定了大豆異黃酮苷元。采用薄層-紫外法和HPLC可以檢測(cè)大豆異黃酮各單體組分的含量。結(jié)果表明，HPLC法最為精確，精密度(RSD＜0.4％)和加標(biāo)回收率(介于95％～105％，絕對(duì)值＜0.2％)，此方法的重復(fù)性和準(zhǔn)確性都令人滿意。薄層-紫外法盡管操作步驟復(fù)雜，但其精密度(RSD＜5％)和準(zhǔn)確度(加標(biāo)回收率介于95％～105％)較好，能夠快捷和方

3、便的檢測(cè)大豆異黃酮苷元的含量。 以β-葡萄糖苷酶酶活力為指標(biāo)對(duì)黑曲霉種子培養(yǎng)基成分進(jìn)行了研究。確定了黑曲霉固體種子培養(yǎng)基的成分：麩皮6.8g，大豆胚芽1.2g，K2HPO432mg，水楊苷0.05％(即4mg)，加水量為1∶1.2，接種量108個(gè)/mL孢子菌懸液1mL。黑曲霉酶液中β-葡萄糖苷酶的酶活力從出發(fā)菌株346.9U/mL增加到710.6U/mL，提高了2.05倍。 通過單因素試驗(yàn)確立了從發(fā)酵胚芽基質(zhì)中提取大豆異

4、黃酮苷元的影響因素，并通過正交試驗(yàn)優(yōu)化了發(fā)酵工藝。結(jié)果表明，最佳工藝條件為粉碎過40目篩的大豆胚芽基質(zhì)，于121℃條件下滅菌15min，室溫下加入50％無菌水?dāng)嚢杈鶆颍尤敕N齡為36h的黑曲霉種子培養(yǎng)基4g(即接種量為8％)混合均勻，再補(bǔ)加25％的無菌水，以及10％的無菌麩皮，混合均勻，于30℃條件下發(fā)酵48h。其一次提取液中苷元產(chǎn)量達(dá)到425.0mg/100g胚芽。比原料中苷元含量48.2mg/100g胚芽提高了近10倍。 針

5、對(duì)目前大豆異黃酮浸提得率較低的缺陷，對(duì)發(fā)酵胚芽基質(zhì)中大豆異黃酮苷元的提取工藝進(jìn)行了研究。正交試驗(yàn)結(jié)果表明：采用80％的乙醇，固液比為1∶7，于70℃條件下提取三次，第一次2h，第二次40min，第三次10min，此時(shí)異黃酮苷元的得率最高，染料木黃酮0.315％，黃豆苷元0.738％，總異黃酮苷元得率達(dá)到1.053％。比原料中苷元含量提高了近22倍。 論文根據(jù)大豆異黃酮的物理和化學(xué)特性，建立了大豆異黃酮及其主要單體的定性和定量分析