兩株產(chǎn)海因酶菌株的分子生物學(xué)及理化性質(zhì)的比較.pdf

1、我們在克隆出發(fā)菌株SS-ori海因酶基因的過程中,偶然得到了一個能呈海因酶陽性反應(yīng)的菌落,定名為YZ-Ⅱ6,并做了較為細致的研究.結(jié)果表明,該菌株的遺傳穩(wěn)定性好,連續(xù)傳八代后海因酶活性仍無明顯變化.而且在YCG培養(yǎng)基中,Amp濃度高達400ug/mL時仍有菌落生長.同樣條件下,SS-ori菌在Amp濃度為50ug/mL時就不生長.分別提取的基因組后進行酶切分析、海因酶基因的擴增、RAPD、ERIC-PCR等檢測,兩者均呈現(xiàn)不同的電泳圖譜

2、.菌株YZ-Ⅱ6的海因酶活性(0.72U/mL)高于出發(fā)菌株SS-ori(0.20U/mL),而N-氨甲酰基D-氨基酸酰氨水解酶活性(0.040U/mL)遠遠低于SS-ori菌(0.45U/mL).形態(tài)和生理生化特征也表明,SS-ori菌周生鞭毛,革蘭氏反應(yīng)呈陰性,YZ-Ⅱ6菌為極生單根鞭毛,革蘭氏反應(yīng)呈陰性.菌株YZ-Ⅱ6(0.5-0.6)×(2.0-3.0)um比菌株SS-ori(0.5-0.6)×(1.5-3.0)um個體稍大,氧

3、化酶和過氧化氫酶試驗均呈陽性,而且兩者都是氧化產(chǎn)酸.所以初步判定YZ-Ⅱ6菌為假單孢桿菌,而SS-ori菌為土壤農(nóng)桿菌.最后通過16S rDNA序列擴增及分析說明YZ-Ⅱ6菌為Pseudomonas putia, SS-ori菌為Sinorhizobium sp.我們還利用PCR方法從菌株YZ-Ⅱ6基因組中克隆得到了海因酶的基因(1440bp),并構(gòu)建了表達質(zhì)粒pET3a-HDTase.重組子pET3a-HDTase在大腸桿菌BL21中