雙靶點(diǎn)干預(yù)對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜VEGF和CTGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 1.在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中，研究結(jié)締組織生長因子(connective tissue growthfactor, CTGF)和血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因表達(dá)隨時間變化，及透射電鏡下觀測大鼠視網(wǎng)膜微血管超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　 2.探討經(jīng)玻璃體腔注射抗VEGF新藥lucentis和CTGF shRNA后，CTGF和VEGFmRNA表達(dá)水

2、平及視網(wǎng)膜微血管超微結(jié)構(gòu)的改變。
　　 方法:
　　 1.將48只大鼠隨機(jī)分為糖尿病組（DM組）和正常對照組（CON組），在造模成功后8、10、12周取大鼠視網(wǎng)膜標(biāo)本行逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時定量PCR檢測VEGF和CTGF的基因表達(dá)變化。同時在各時點(diǎn)取各組大鼠眼杯，經(jīng)戊二醛固定，透射電子顯微鏡觀察。
　　 2.根據(jù)實(shí)驗1結(jié)果，在造模后10周，將DM大鼠隨機(jī)分為lucentis單靶點(diǎn)干預(yù)組，CTGF shRNA單靶點(diǎn)干預(yù)組，l

3、ucentis和CTGF shRNA雙靶點(diǎn)干預(yù)組，未干預(yù)組，以及正常對照組。干預(yù)1周后取各組大鼠的視網(wǎng)膜標(biāo)本，行實(shí)時定量PCR檢測VEGF和CTGF的基因表達(dá)及透射電鏡觀察。
　　 結(jié)果:
　　 1.實(shí)驗1:在第8周時DM組大鼠視網(wǎng)膜CTGF mRNA水平較正常組顯著增高(P=0.037)且一直持續(xù)到第12周(P=0.032，P=0.039)，而VEGF的mRNA水平在第10周較正常對照組開始升高，持續(xù)到12周，差異均有

4、統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.043，P=0.036)。
　　 2.實(shí)驗1:CON組未見異常，DM組從第8周開始出現(xiàn)異常改變，表現(xiàn)為視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，向管腔突出，細(xì)胞核內(nèi)異染色質(zhì)凝集居邊，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體明顯腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈池樣擴(kuò)張，毛細(xì)血管基底膜增厚。且隨著病程延長，改變更加明顯，可見到閉鎖的毛細(xì)血管，以DM12組最為顯著。
　　 3.實(shí)驗2:Lucentis單靶點(diǎn)干預(yù)組，VEGF基因表達(dá)較DM未干預(yù)組顯著降低(P=0.0

5、14)，而CTGF表達(dá)較DM未干預(yù)組則顯著升高(P=0.048); CTGFshRNA單靶點(diǎn)干預(yù)組，CTGF mRNA水平降至與正常對照組相似(P=0.825)，而且VEGF mRNA表達(dá)也降低(P=0.026);雙靶點(diǎn)干預(yù)組，VEGF和CTGFmRNA較未干預(yù)組均明顯下調(diào)(P＜0.001，P=0.001)，與正常對照組無顯著區(qū)別(P=0.292，P=0.287)。
　　 4.實(shí)驗2:CON組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管管腔平滑完整，內(nèi)皮細(xì)胞

6、扁平緊貼于連續(xù)的基膜上。DM未干預(yù)組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞水腫，異染色質(zhì)邊集。毛細(xì)血管管腔狹窄。雙靶點(diǎn)干預(yù)組毛細(xì)血管腔較完整，內(nèi)皮細(xì)胞稍水腫，周細(xì)胞清晰完整，超微結(jié)構(gòu)接近于正常對照組。Lucentis和CTGF shRNA單靶點(diǎn)干預(yù)組仍可見視網(wǎng)膜毛細(xì)血管管腔狹窄，內(nèi)皮細(xì)胞水腫，異染色質(zhì)邊集，超微結(jié)構(gòu)完整性明顯低于雙靶點(diǎn)干預(yù)組。
　　 結(jié)論:
　　 在早期DM大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)，VEGF和CTGF的基因表達(dá)即開始升高，且CTGF