整合素β1反義寡核苷酸對宮頸癌HeLa細胞體外增殖的影響.pdf

1、 目的 ：利用整合素 β1 反義脫氧寡核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)封閉宮頸癌 HeLa細胞的整合素 β1基因,觀察其對宮頸癌 HeLa 細胞增殖、凋亡和細胞周期的影響及HeLa細胞整合素β1表達情況,探討整合素β1在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中可能的作用。
方法：
1.利用脂質體介導核苷酸序列轉染宮頸癌 HeLa 細胞。實驗分整合素 β1反義寡核苷酸序列+脂質

2、體組(ASODN組)、隨機寡核苷酸序列+脂質體組(RODN組)、脂質體組、空白對照組(HeLa細胞組)。
2.采用 WST-1法檢測轉染整合素 β1反義寡核苷酸后不同時間段宮頸癌HeLa細胞增殖情況。
3.利用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測各組細胞整合素β1mRNA的表達。
4.Western blot技術檢測各組細胞整合素β1蛋白的表達。
5.流式細胞術檢測細胞周期、細

3、胞凋亡。
6.所得各組數(shù)據均以均數(shù)±標準差( x ±s)表示,由 SPSS17.0 統(tǒng)計軟件進行方差分析(F檢驗)和t檢驗,以P<0.05為有統(tǒng)計學差異。
結果：
1.反義寡核苷酸(ASODN)轉染 24 小時即可對宮頸癌 HeLa 細胞生長產生抑制,作用 24小時、48小時、72小時 ASODN組抑制率分為：26.17%, 39.78%, 45.6%, RODN 組抑制率分別為：7.41%,2

4、.73%,2.58%,脂質體組抑制率分別為：4.47%,2.36%,2.21%。由此可見反義寡核苷酸(ASODN)對宮頸癌 HeLa 細胞的生長有明顯抑制作用,且呈時間依賴性,隨著作用時間延長抑制作用增強。
2. 轉染整合素β1反義寡核苷酸48小時可使HeLa細胞的整合素β1mRNA表達水平明顯降低,作用48小時、72小時ASODN組的整合素 β1mRNA表達分別為：0.8659±0.0647,0.5950±0.0066,

5、明顯低于 HeLa細胞組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。脂質體組和 RODN組分別在相同時間點與 HeLa細胞組相比,整合素 β1mRNA表達水平有降低,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。ASODN 組在 24 小時、48 小時、72 小時三個時間點整合素 β1mRNA 表達分別為 1.367± 0.01221 , 0.9361 ± 0.009 , 0.6981 ± 0.0075 ,結果表明反義寡核苷酸能特異性封閉整合素β1基因。

6、
3.轉染整合素β1反義寡核苷酸72小時后,宮頸癌HeLa細胞整合素 β1 蛋白由 1.0900±0.0367 降低為 0.8370±0.0650,與 RODN組、脂質體組、HeLa 細胞組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05) , RODN 組、脂質體組與 HeLa 細胞組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
4.轉染整合素 β1反義寡核苷酸組 HeLa細胞 48小時后其生長周期被阻滯在 G2/M期,A

7、SODN組、RODN組、脂質體組、HeLa細胞組 G2 期細胞比率分別為：(32.20±1.8)%,(15.16±0.5)%,(13.80 ±1.0)%,(13.23±0.6)%,ASODN 組與 HeLa 細胞組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；脂質體組和RODN組與HeLa空白組相比較,細胞周期無明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
5.ASODN 組細胞隨著轉染后時間的延長,其凋亡率逐漸增加,相同時間點