Hippo-YAP通路在胃癌中的表達(dá)及機(jī)制探討.pdf

1、目的：檢測(cè)Hippo-YAP通路在胃癌中的表達(dá)并探討其可能的機(jī)制，探討胃癌的發(fā)病機(jī)制，尋找胃癌基因治療的潛在靶點(diǎn)。
　　 材料與方法：收集正常胃粘膜組織，胃腺瘤與胃癌的組織標(biāo)本共163例，在三個(gè)實(shí)驗(yàn)組中，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)Hippo通路核心蛋白Mst1/2，Sav1以及Lats1/2的表達(dá)；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法、Western-blot以及RT-RCR檢測(cè)YAP蛋白質(zhì)及mRNA的表達(dá)；應(yīng)用甲基特異性PCR檢測(cè)YAP基因

2、甲基化水平；培養(yǎng)胃癌細(xì)胞系SGC-7901，應(yīng)用RNA干擾技術(shù)制備YAP SiRNA慢病毒載體并轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞系SGC-7901，MTT法檢測(cè)YAP SiRNA對(duì)胃癌細(xì)胞系SGC-7901增殖的影響。
　　 結(jié)果：1.Mst1/2及Lats1在胃癌中的表達(dá)明顯低于正常胃粘膜及胃腺瘤，在正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；Sav1在正常胃粘膜，胃腺瘤及胃癌中的表達(dá)并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Sav1及Lats1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的表

3、達(dá)明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織。2.免疫組化染色顯示：非磷酸化YAP蛋白主要為細(xì)胞核表達(dá)，在胃癌中的表達(dá)明顯高于正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達(dá)，在正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；磷酸化YAP蛋白主要為漿表達(dá)，在正常胃粘膜，胃腺瘤及胃癌中的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Western-blot結(jié)果顯示：YAP蛋白在胃癌中的表達(dá)明顯高于在正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達(dá)，在正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；RT-PCR結(jié)果顯示：YAP mRNA在

4、胃癌中的表達(dá)明顯高于在正常胃粘膜及胃腺瘤中的表達(dá)，正常胃粘膜及胃腺瘤中YAP mRNA的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；3胃癌中YAP基因甲基化頻率明顯低于正常胃粘膜及胃腺瘤，呈低甲基化狀態(tài)；正常胃粘膜及胃腺瘤中YAP甲基化頻率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4.成功構(gòu)建YAP SiRNA慢病毒載體，轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞系SGC-7901并有效敲減細(xì)胞系中YAP的表達(dá)，MTT法檢測(cè)顯示YAP基因沉默可明顯抑制胃癌細(xì)胞系SGC-7901的增殖。
　　 結(jié)論：1.Hipp