二氫青蒿素對抑制人尿道瘢痕成纖維細胞增殖的實驗研究.pdf

1、目的：
　　尿道損傷及尿道手術(shù)后尿道狹窄發(fā)生率較高。至今，臨床上尚無切實有效的方法治療尿道狹窄，始終不能擺脫狹窄-擴張/手術(shù)-再狹窄的診治怪圈，給患者帶來極大的痛苦。尿道瘢痕組織是尿道創(chuàng)傷修復過程的產(chǎn)物，沒有瘢痕就不會有創(chuàng)面的愈合。但是瘢痕一旦過度生長，就會產(chǎn)生尿道狹窄。目前研究發(fā)現(xiàn)：狹窄的尿道組織存在典型的瘢痕過度增生改變。但對引起尿道瘢痕過度增生的影響因素不是很明確，因而缺乏有效的措施阻止尿道狹窄的發(fā)生。在對皮膚創(chuàng)面瘢痕形成的

2、研究中發(fā)現(xiàn)：創(chuàng)面愈合過程中成纖維細胞表現(xiàn)出強烈的增殖能力以及膠原大量分泌、沉積，所以認為成纖維細胞過度表達及膠原的異常分泌是瘢痕產(chǎn)生的根本原因。成纖維細胞是最主要的修復細胞。青蒿素是我國有自主知識產(chǎn)權(quán)的藥物，我國正對該藥進行大力開發(fā)和研究。近年發(fā)現(xiàn)青蒿素有較好的抑制瘢痕成纖維細胞增殖作用。本課題旨在通過對二氫青蒿素干預后抑制人尿道瘢痕成纖維細胞增殖的研究，以揭示二氫青蒿素抑制人尿道瘢痕成纖維細胞增殖的機制，為人尿道瘢痕防治開辟新路，為臨

3、床預防和治療尿道瘢痕狹窄提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.采用組織塊貼壁法進行尿道瘢痕成纖維細胞的原代培養(yǎng)，使用含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，37℃，5％CO2，飽和濕度下培養(yǎng)；描述其生長曲線、分裂指數(shù)、形態(tài)及波形蛋白表達。
　　2.采用MTT法測定二氫青蒿素對尿道瘢痕成纖維細胞的IC50,采用TUNEL法檢測二氫青蒿素作用后尿道瘢痕成纖維細胞凋亡情況，同時采用比色法測定caspase-3、8和9在二氫

4、青蒿素作用后的活化情況，以判斷二氫青蒿素作用后是否導致尿道瘢痕成纖維細胞中的caspase活化，并了解是通過哪條通路促進凋亡。
　　結(jié)果：
　　1.尿道瘢痕成纖維細胞培養(yǎng)成功率75％（6/8）；50～66天可傳第一代，以后每5～10天可傳一代，傳代后生長良好；細胞為長梭形，波形蛋白表達陽性。
　　2.二氫青蒿素對尿道瘢痕成纖維細胞的IC50為145μmol/L。通過TUNEL法檢測到145μmol/L二氫青蒿素作用于尿