柞蠶凝集素基因的鑒定,表達(dá)及功能分析.pdf

1、先天性免疫是昆蟲(chóng)抵御微生物感染的重要途徑,它包括體液免疫和細(xì)胞免疫。凝集素（Lectin）是重要的模式識(shí)別受體（PRR），廣泛存在于植物，動(dòng)物和昆蟲(chóng)中，在宿主對(duì)病原體的防御中起重要作用。
　　本文根據(jù)已報(bào)道的家蠶和其他昆蟲(chóng)的凝集素cDNA序列，設(shè)計(jì)特異性引物，利用RT-PCR和 cDNA末端快速擴(kuò)增法(RACE-PCR)技術(shù)從柞蠶cDNA中擴(kuò)增出了凝集素基因序列，經(jīng)克隆、測(cè)序和分析后獲得了柞蠶凝集素的基因序列（GenBank登錄號(hào)

2、：KF285999），基因全長(zhǎng)1017bp，包含一個(gè)927 bp的開(kāi)放閱讀框，一個(gè)26bp的5′端非編碼區(qū)序列(5′UTR)和一個(gè)64 bp的3′端非編碼區(qū)序列(3’UTR)。該基因編碼308個(gè)氨基酸，并包含一個(gè)由15個(gè)氨基酸組成的信號(hào)肽，預(yù)測(cè)成熟的蛋白分子量大約為35kD，等電點(diǎn)為4.99。生物信息學(xué)分析表明這個(gè)新的凝集素有兩個(gè)保守的多糖類識(shí)別結(jié)構(gòu)域（CRD），屬于C-型凝集素超家族。
　　利用半定量PCR方法研究ApL3的組織

3、分布情況，發(fā)現(xiàn)ApL3在所檢組織中均能表達(dá)且在脂肪體中表達(dá)量高，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)被用于分析經(jīng)不同病原微生物刺激后ApL3的表達(dá)差異，研究發(fā)現(xiàn)微生物刺激可導(dǎo)致ApL3的表達(dá)上調(diào)。采用PCR法擴(kuò)增了柞蠶凝集素的開(kāi)放閱讀框，并分別連接至 pET-28a(+)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株中，用IPTG進(jìn)行了不同濃度的誘導(dǎo)表達(dá)。經(jīng) SDS-PAGE電泳和Western blotting表明，目的蛋白在大腸桿菌中得到了穩(wěn)