shRNA干擾HIF-1α對人宮頸癌HeLa細胞HIF-1α表達及細胞周期分布和細胞凋亡的影響研究.pdf

1、背景和目的：乏氧可以通過影響腫瘤細胞的周期分布和凋亡來影響腫瘤的放療敏感性，乏氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha，HIF-1α)在乏氧引起的放療抵抗中起了中樞調(diào)節(jié)作用。本研究采用RNA干擾技術(shù)抑制人宮頸癌HeLa細胞HIF-1α的表達，研究shRNA干擾HIF-1α對HeLa細胞周期分布和細胞凋亡的影響,并分析乏氧對人宮頸癌HeLa細胞周期分布及細胞凋亡的影響是否與HIF-1α有關(guān)。

2、>　　 方法：將人宮頸癌HeLa細胞株、轉(zhuǎn)染HIF-1α-shRNA質(zhì)粒的HeLa細胞株及轉(zhuǎn)染pGenesil-1空白質(zhì)粒的HeLa細胞株分別1％O2低氧培養(yǎng)(0h、12h和24h)，應(yīng)用Western blot檢測三組細胞HIF-1α蛋白的表達情況。應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測上述三種細胞不同乏氧時間點的周期分布及凋亡情況。采用統(tǒng)計學(xué)軟件SSPS16.0行t檢驗及方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：Western

3、blot分析顯示三組細胞HIF-1α蛋白的表達量隨著乏氧時間的延長而逐漸增加，差異均具有顯著性(P<0.01)，HIF-1α-shRNA/HeLa細胞HIF-1a蛋白的表達量在不同的乏氧處理時間點與pGenesil-1/HeLa細胞及HeLa細胞分別進行比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。流式細胞儀分析細胞周期分布三組細胞隨著乏氧時間延長G0/G1期細胞比例逐漸增加(P<0.01)，S期細胞比例逐漸減少(P<0.01)，即出現(xiàn)G1

4、/S期阻滯的現(xiàn)象，抑制HIF-1α的表達以后，G1/S期阻滯的現(xiàn)象有所減弱。流式細胞術(shù)測凋亡率顯示各組細胞在乏氧后凋亡率均有所增加，差異具有顯著性(P<0.05)，HIF-1α-shRNA/HeLa細胞的凋亡率不管是常氧組還是乏氧24h組均高于pGenesil-1/HeLa細胞和HeLa細胞，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。pGenesil-1/HeLa細胞與HeLa細胞之間在HIF-1a蛋白表達水平、G1/S阻滯程度和凋亡率上的