Beclin1對(duì)喉鱗癌細(xì)胞Hep-2紫杉醇敏感性影響的體外研究.pdf

1、目的：
　　喉鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma，LSCC)是常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤之一。目前臨床上對(duì)喉癌的治療多采用手術(shù)結(jié)合放化療的綜合治療方案，化療耐藥影響了喉癌的治療效果。自噬性細(xì)胞死亡是Ⅱ型程序性細(xì)胞死亡，其不同于凋亡，不依賴caspase。Beclin1是一種自噬調(diào)節(jié)基因，通過(guò)與P13K形成復(fù)合物促進(jìn)自噬，在自噬初級(jí)階段有重要作用。已有研究證實(shí)Beclin1能停滯細(xì)胞周期并參與調(diào)

2、節(jié)細(xì)胞凋亡。因此本研究我們檢測(cè)不同Beclin1表達(dá)水平對(duì)喉癌細(xì)胞紫杉醇敏感性的影響。
　　方法：
　　本研究利用以喉癌細(xì)胞株Hep-2、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-Beclin1質(zhì)粒的喉癌細(xì)胞株Hep-2-Beclin1、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3.1質(zhì)粒載體的喉癌細(xì)胞株Hep-2-pcDNA3.1為研究對(duì)象，對(duì)三組細(xì)胞施加不同濃度的化療藥物紫杉醇（1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L）干預(yù)24小時(shí)，利用

3、MTT法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)紫杉醇對(duì)三組細(xì)胞增殖和凋亡的影響。利用western blot檢測(cè)三組細(xì)胞Akt和p-Akt蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　不同濃度的紫杉醇處理后的三組喉癌細(xì)胞與藥物終濃度正相關(guān)地出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制率提高。當(dāng)紫杉醇濃度大于5μg/L時(shí)，紫杉醇對(duì)Hep-2-Beclin1的生長(zhǎng)抑制率高于對(duì)另兩株細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。以終濃度為10μg/L、20μg/L的紫杉醇處理三株喉癌細(xì)胞24小時(shí)后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示:1

4、0μg/L紫杉醇處理Hep-2、Hep-2-pcDNA3.1、Hep-2-Beclin1細(xì)胞的凋亡率分別為:23.75％±3.77％，21.25％±4.92％，20μg/L，32.50％±5.97％;20μg/L紫杉醇處理Hep-2、Hep-2-pcDNA3.1、Hep-2-Beclin1細(xì)胞的凋亡率分別為:38.75％±4.79％、38.75％±6.55％、50.00％±7.26％。各組細(xì)胞20μg/L紫杉醇處理后細(xì)胞的凋亡率均高于1

5、0μg/L紫杉醇處理后細(xì)胞的凋亡率(P＜0.05)。紫杉醇處理后Hep-2-Beclin1組細(xì)胞凋亡率均高于Hep-2組和Hep-2-pcDNA3.1組(P＜0.05)。Western blot結(jié)果顯示:Hep-2、Hep-2-pcDNA3.1、Hep-2-Beclin1細(xì)胞Akt相對(duì)蛋白表達(dá)量分別為:1.24±0.03、1.25±0.05、1.27±0.09，三組細(xì)胞間Akt相對(duì)蛋白表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);Hep-2、He