三七總皂苷對大鼠阿霉素腎病結(jié)締組織生長因子表達(dá)調(diào)控的實驗研究.pdf

1、腎纖維化是多種原因引起腎臟損傷后的共同轉(zhuǎn)歸，是慢性腎衰竭的主要病理學(xué)基礎(chǔ)。阿霉素所致的腎纖維化動物模型具有慢性進(jìn)行性腎損害的特點(diǎn)，與人類進(jìn)行性腎臟疾病的表現(xiàn)非常類似。三七總皂苷(Panax notoginseng saponins，PNS)是五加科人參屬植物三七的主要有效活性成分，其塊根中含皂苷約12％，其中主要成分與人參一致，即人參二醇型皂苷Rb1、人參三醇型皂苷Rg1，總含量較人參高。它具有擴(kuò)張血管，抑制血小板聚集，延長凝血時間，降

2、血脂，清除自由基，抗炎，抗氧化等藥理作用。中醫(yī)理論認(rèn)為，腎纖維化等結(jié)締組織增生性疾病與血瘀證相關(guān)?；钛鏊幬飳Υ祟惣膊∮歇?dú)特功效，三七補(bǔ)血而不留瘀，化瘀而不傷血的功效又契合祛邪扶正的中醫(yī)治療原則。研究認(rèn)為，在腎纖維化發(fā)生發(fā)展過程中，有多種生長因子發(fā)揮重要作用。結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)作為轉(zhuǎn)化生長因子-β的下游因子，要通過介導(dǎo)細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成等作用，在腎纖維

3、化中扮演重要角色。所以，研究三七總皂苷對CTGF異常表達(dá)的抑制作用對闡釋其防治大鼠阿霉素腎病的作用機(jī)制具有重要意義。 目的：本研究旨在觀察三七總皂苷對阿霉素腎病大鼠生理生化指標(biāo)、腎臟病理變化以及腎組織CTGFmRNA及其蛋白表達(dá)的影響。觀察三七總皂苷對體外培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞在脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)刺激下引起的細(xì)胞增殖和CTGFmRNA及其蛋白表達(dá)的影響。從整體、組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)和基因水平探討三

4、七總皂苷延緩腎纖維化的作用機(jī)制，為進(jìn)一步研究其防治腎纖維化的作用機(jī)理提供實驗依據(jù)。 方法：整體實驗，采用單側(cè)腎切除合并阿霉素腹腔注射造大鼠阿霉素腎病模型。將大鼠分為正常組、假手術(shù)組、模型組、苯那普利組和三七總皂苷組，并檢測下列指標(biāo)。 1．每周檢測大鼠體重，隔周進(jìn)行尿蛋白定量檢測，于實驗第10周處死大鼠，分離血清，測定其中BUN、Scr、Cho、TG、TP、Alb的含量，腎組織做HE染色、六胺銀染色、Mallory染色和M

5、asson染色觀察腎組織病理形態(tài)學(xué)變化； 2．采用原位雜交法檢測各組大鼠腎組織內(nèi)CTGFmRNA的表達(dá)； 3．采用免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠腎組織內(nèi)CTGF蛋白的表達(dá)。 細(xì)胞實驗，采用腎小球系膜細(xì)胞體外培養(yǎng)。將細(xì)胞分為空白組、LPS組、苯那普利組、三七總皂苷組。除空白組外，其余各組均用LPS刺激，檢測下列指標(biāo)。 1．用MTT法檢測三七總皂苷對LPS刺激腎小球系膜細(xì)胞在12h，24h，48h和60h增殖的影

6、響； 2．采用RT-PCR法檢測LPS誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞CTGFmRNA的表達(dá)情況和三七總皂苷對該指標(biāo)的影響； 3．采用細(xì)胞爬片免疫組化法和Western-blot法檢測LPS誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞CTGF蛋白的表達(dá)情況和三七總皂苷及Rg1、Rb1對該指標(biāo)的影響。 結(jié)果 1．三七總皂苷組大鼠體重明顯高于模型組(P<0.05或P<0.01)，三七總皂苷可以減少阿霉素腎病大鼠尿蛋白排泄(與模型組相比P<0.05)

7、，降低血肌酐和尿素氮，降低血漿膽固醇和甘油三脂，升高血漿總蛋白和白蛋白(與模型組相比P<0.05)，從而改善腎功能，糾正脂質(zhì)代謝紊亂，減輕腎臟的病理損傷(腎小球硬化指數(shù)和腎間質(zhì)病變評分結(jié)果與模型組相比P<0.01)； 2．三七總皂苷組各個時間點(diǎn)LPS刺激引起的腎小球系膜細(xì)胞增殖情況顯著低于LPS組(P<0.05)，該作用與苯那普利組相比無顯著差異； 3．三七總皂苷組阿霉素腎病大鼠腎組織CTGFmRNA的表達(dá)顯著降低(與模

8、型組相比P<0.05)，并且，CTGF蛋白表達(dá)明顯降低(與模型組相比P<0.01)與苯那普利組相比無顯著差異； 4．三七總皂苷組LPS誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞內(nèi)CTGFmRNA的表達(dá)明顯降低(與LPS組相比P<0.01)； 5．三七總皂苷及Rg1、Rb1大小劑量組LPS誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞內(nèi)CTGF蛋白的表達(dá)與LPS組相比也明顯降低(P<0.05)，上述指標(biāo)與苯那普利組相比均無顯著差異。 結(jié)論 1．三七總皂苷