降膽固醇乳酸菌的篩選、鑒定及降解機(jī)制的研究.pdf

1、目的：隨著生活水平的不斷提高,人們對(duì)食品營(yíng)養(yǎng)的要求也越來(lái)越高,但隨之而來(lái)的負(fù)面影響卻是動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、高血壓等心腦血管疾病的發(fā)病率不斷提高。國(guó)內(nèi)外大量臨床試驗(yàn)證實(shí),服用乳酸菌及其相關(guān)制品具有減少人體血清膽固醇含量,降低心血管疾病發(fā)病率的功效。本文通過(guò)篩選具有降膽固醇功能的乳酸菌株,并研究了它們的體外益生特性、體外降膽固醇機(jī)制和大鼠體內(nèi)降膽固醇功能療效,為推動(dòng)功能性乳酸菌一降膽固醇乳酸菌的研究和應(yīng)用提供原始菌株和基礎(chǔ)研究支撐。

2、>　　 方法：全文以中國(guó)傳統(tǒng)食品泡菜、臘腸為材料,以碳酸鈣-MRS(calcium carbonate-Man Rogosa and Sharp Medium)選擇性培養(yǎng)基篩選乳酸菌,應(yīng)用改良的膽固醇培養(yǎng)基篩選具有較高降膽固醇能力的乳酸菌；結(jié)合菌落形態(tài)學(xué)、接觸酶反應(yīng)、革蘭氏染色、碳水化合物微量鑒定管及16SrRNA寡核苷酸堿基序列分析鑒定；研究其耐酸性,耐膽鹽活性,生長(zhǎng)曲線(xiàn)及產(chǎn)酸特性；采用藥敏紙片法測(cè)定菌株對(duì)抗生素的敏感性,雙層瓊脂牛

3、津杯法測(cè)定菌株對(duì)常見(jiàn)致病菌的抑制效果；比較膽鹽存在與否、不同膽鹽成分對(duì)菌株在培養(yǎng)基中降膽固醇活性的影響；研究膽固醇在體外降解后,其在細(xì)菌沉淀、胞內(nèi)和胞外的分布情況,探討菌株體外降膽固醇的機(jī)制；構(gòu)建高脂血癥大鼠模型,測(cè)定灌胃菌株前后大鼠血清主要指標(biāo)的含量變化,研究降膽固醇乳酸菌在體內(nèi)的降膽固醇活性。
　　 結(jié)果：篩選得到的兩個(gè)菌株LpT1和LpT2其降解率分別達(dá)到49.11％和50.03％,經(jīng)鑒定為植物乳桿菌；同時(shí),植物乳桿菌Lp

4、T1和LpT2都呈現(xiàn)了較強(qiáng)的耐酸性耐膽鹽活性,在pH3.0條件下存活率都比較高,在含0.3％膽鹽的培養(yǎng)基中兩株菌的生長(zhǎng)都受到了一定抑制；其中植物乳桿菌LpT1在pH3.0培養(yǎng)基中能至少存活8 h,在含0.1％膽鹽的培養(yǎng)基中能存活至少8 h；植物乳桿菌LpT2在pH2.0的培養(yǎng)基中至少能存活6 h,在含0.1％膽鹽的培養(yǎng)基中都能存活至少8h；植物乳桿菌LpT1在第14小時(shí)開(kāi)始進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,在第22小時(shí)進(jìn)入生長(zhǎng)穩(wěn)定期,生長(zhǎng)30 h后最低p

5、H值4.2左右；植物乳桿菌LpT2在第12小時(shí)進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)曲線(xiàn),第20小時(shí)進(jìn)入穩(wěn)定期,生長(zhǎng)30 h后者最低pH值在4.0左右；植物乳桿菌LpT1和LpT2對(duì)18種抗生素都比較敏感,抑菌圈基本都在20 mm以上；它們的發(fā)酵上清液對(duì)沙門(mén)氏菌、銅綠假單孢菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制效果都比較明顯。
　　 植物乳桿菌LpT1和LpT2在含有結(jié)合型膽鹽?；悄懰徕c培養(yǎng)基中的降解膽固醇的活性與未含有?；悄懰徕c培養(yǎng)基中的降

6、膽固醇活性沒(méi)有顯著差異；植物乳桿菌LpT2在含有牛膽鹽與未含有牛膽鹽培養(yǎng)基中降膽固醇的活性存在顯著差異,而植物乳桿菌LpT1沒(méi)有顯著差異；飼喂高脂飼料7 d后,成功構(gòu)建出高脂血癥大鼠模型；灌胃菌株LpT14周后,大鼠血清中總膽固醇含量下降極顯著(p<0.01),甘油三脂下降顯著(p<0.05),高密度脂蛋白膽固醇幾乎沒(méi)有變化,低密度脂蛋白膽固醇含量下降比較顯著(p<0.05),動(dòng)脈硬化指數(shù)明顯下降,HDL-C/TC的比值明顯升高；灌胃植

7、物乳桿菌LpT24 w后,大鼠血清中總膽固醇的含量明顯下降(p<0.05),低密度脂蛋白膽固醇也下降比較顯著(p<0.05),甘油三脂出現(xiàn)下降但不顯著,高密度脂蛋白膽固醇出現(xiàn)下降；灌胃植物乳桿菌和陽(yáng)性藥物的大鼠體重增加率明顯低于灌胃蒸餾水的大鼠體重增加率。
　　 結(jié)論：篩選得到的植物乳桿菌LpT1和LpT2在體外具有較高的降膽固醇活性,在體內(nèi)對(duì)高脂血癥大鼠也具有一定的療效,同時(shí)能減緩大鼠對(duì)高脂飼料的利用率,緩解體重的增加率；另外