余甘多糖分離純化、結(jié)構(gòu)及抗氧化活性研究.pdf

1、余甘(Phyllanthus emblica L)是大戟科葉下珠屬植物,是世界衛(wèi)生組織指定在世界范圍內(nèi)推廣種植的3種保健植物之一,2002年被我國(guó)衛(wèi)生部確定為藥食兩用植物,是我國(guó)的傳統(tǒng)民族用藥。余甘多糖是余甘的主要活性成分,具有抗腫瘤和抗氧化生物活性。目前對(duì)余甘多糖的研究主要側(cè)重于精多糖藥理活性探索,對(duì)其活性級(jí)分及結(jié)構(gòu)研究較少,且不夠深入。本文以余甘主栽品種“粉甘”果實(shí)為研究對(duì)象,對(duì)余甘多糖的提取技術(shù)、分離純化方法、結(jié)構(gòu)信息以及多糖抗氧

2、化活性進(jìn)行了系統(tǒng)研究。研究結(jié)果如下：
　　 ⑴從余甘中提取出粗多糖,其糖含量為31.13％;粗多糖經(jīng)凍融分級(jí)、脫色素、除蛋白、透析和凝膠柱層析等初步分級(jí)純化后,得白色絲狀余甘精制多糖EPS,多糖收率10.33％;EPS的化學(xué)組成為:中性糖61.67％,糖醛酸26.04％,蛋白質(zhì)1.98％,中性糖由Gal、Rha、Ara、Gle、Xyl和少量Man組成,糖醛酸為GalA。
　　 ⑵研究了余甘多糖的超聲波強(qiáng)化提取和微波輔助萃

3、取工藝。超聲波提取最佳工藝參數(shù):超聲波提取溫度80℃、超聲波時(shí)間70 min、超聲波功率475 W、料液比1:20;微波前處理.熱水浸提法最佳工藝參數(shù):微波前處理功率480W,微波處理時(shí)間60s,熱水浸提溫度90℃,浸提時(shí)間4h。
　　 ⑶對(duì)水提余甘精多糖的分級(jí)純化方法和化學(xué)組成進(jìn)行了研究。EPS經(jīng)DEAE-Sepharose CL-6B柱層析分級(jí)后得到2個(gè)多糖級(jí)分EPS1和EPS2;EPS1為中性多糖,經(jīng)HPGFC分級(jí)后得到2

4、個(gè)多糖級(jí)分EPS1-1和EPS1-2;EPS2為分子量均一的酸性多糖,;EPS1-1、EPS1-2和EPS2分別占總洗脫量的3.39％、19.60％和77.01％,總回收率92.32％。
　　 ⑷EPS1-1是一種中性多糖,相對(duì)分子質(zhì)量約為123 Kda,純度98.53％,總糖95.09％,主要由Gal、Glc組成;EPS1-2總糖含量96.66％,純度98.91％,分子量約為15 Kda,是一種中性多糖,主要由Gal、Glc和

5、Xyl組成;IR光譜顯示EPS1-1和EPS1-2是β構(gòu)型的吡喃醛糖。
　　 ⑸EPS2是一種酸性多糖,含有79.01％的半乳糖醛酸,總糖含量97.53％,相對(duì)分子質(zhì)量約為140 Kda,純度98.96％,主要由Gala、Gal和Rha組成,還有少量的Ara;單糖組成結(jié)合IR圖譜確定EPS2是一種果膠多糖,多糖分子以α-糖苷鍵為主,并含有一定量的β-糖苷鍵。
　　 ⑹應(yīng)用NMR、GC-MS、FT-IR、GC、HPLC等儀

6、器分析技術(shù),配合部分酸水解、甲基化分析等經(jīng)典化學(xué)方法研究了余甘多糖EPS1-2和EPS2的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
　　 ⑺EPS1-2的結(jié)構(gòu)特征為:糖殘基構(gòu)型主要是1,4-,1,6-β-D-Galp、T-,1,4-,1,3,6-β-D-Glep以及1,3,6-,1,2-β-D-Manp;主鏈由Galp和Glcp連接形成半乳葡聚糖,(1→)-β-D-Glcp為主鏈的非還原性末端殘基,主鏈每五個(gè)糖殘基中有一個(gè)分支;由1,6-β-D-Glcp通過(guò)

7、O-3位與1,3,6-,1,2-β-D-Manp等中性糖側(cè)鏈相連;Manp殘基處于支鏈位置,1,3,6-Manp處于支鏈的核心區(qū)域。EPS1-2主要由β-構(gòu)型構(gòu)成,含有少量α-構(gòu)型。部分糖殘基被乙?；〈?。EPS1-2重復(fù)結(jié)構(gòu)單位可能為:()
　　 ⑻EPS2一種典型的果膠多糖,主鏈由1,4.D-GalpA線性連接形成半乳糖醛酸聚糖,由1,4-D-GalpA通過(guò)O-4位與1,2.、1,2,4-L-Rhap的O-1位交替連接形成含

8、有較多分支的鼠李糖半乳糖醛酸聚糖。半乳糖醛酸聚糖鏈部分羧基被甲酯化,部分O-2或O-3位被乙?；〈-、1,6-、1,3,6-α-Galp和T-、1,5-α-Araf聚合形成的阿拉伯半乳聚糖以及半乳聚糖是EPS2側(cè)鏈的主要組成,通過(guò)Rhap殘基的O-4位與主鏈相連。T-α-GalpA、T-α-L-Araf和T-β-Galp位于非還原性末端。EPS2可能的一種分子結(jié)構(gòu)為:()
　　 ⑼通過(guò)檢測(cè)EPS、EPS1、EPS1-2和E

9、PS2對(duì)羥基自由基、DPPH自由基、超氧陰離子自由基的清除能力以及抗脂質(zhì)過(guò)氧化和還原能力,對(duì)余甘多糖的體外抗氧化活性進(jìn)行了研究,并與陽(yáng)性對(duì)照BHT進(jìn)行比較。結(jié)果表明,EPS1-2和EPS2均表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗氧化活性,各級(jí)分多糖的抗氧化活性大小為EPS2＞EPS1-2＞EPS1＞EPS,均多糖的活性大于雜多糖;EPS2的還原能力強(qiáng)于BHT。
　　 ⑽酸性多聚糖EPS2的抗氧化活性高于中性多聚糖EPS1-2和EPS1,這與酸性多糖含有