消瘤湯抗腫瘤作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的： 消瘤湯是由白花蛇舌草、黃芪，半枝蓮、藤梨根、白英、龍葵等藥物組成，具有清熱解毒，扶正培本，活血消腫，化瘀利濕之功效，諸藥配伍，扶正祛邪，攻補(bǔ)兼施，氣血同治，痰瘀熱毒并除．本研究在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下，通過中藥血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，從細(xì)胞、分子水平系統(tǒng)地探討消瘤湯抗腫瘤作用機(jī)理。觀察消瘤湯含藥血清對肝癌細(xì)胞Bel-7402增殖的影響、細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期變化。研究消瘤湯含藥血清對肝癌細(xì)胞Bel-7402凋亡的誘導(dǎo)作用，探討消瘤湯誘導(dǎo)

2、肝癌細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制，為臨床上應(yīng)用該方治療惡性腫瘤提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 選用SD大鼠30只，隨機(jī)分為五組，即消瘤湯高、中、低劑量組、氟脲嘧啶組、空白對照組。用中藥血清藥理學(xué)方法，制備各受試藥物含藥血清和無藥血清。各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞分別加入各受試藥物血清，空白對照組加入無藥血清，分別培養(yǎng)24h，48h。 1、用臺盼藍(lán)染色檢測各組細(xì)胞藍(lán)染率。 2、通過MTT(噻唑藍(lán))比色法檢測各組細(xì)胞抑制率。 3、流式

3、細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡率。 4、流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞周期變化。 結(jié)果： 1、臺盼藍(lán)染色顯示，細(xì)胞藍(lán)染率無明顯變化。 2、MTT比色顯示，各實(shí)驗(yàn)加藥組細(xì)胞存活率降低，細(xì)胞生長增殖明顯受到抑制，隨著時間的延長，細(xì)胞的相對抑制率逐漸增加，消瘤湯含藥血清藥物濃度較低時，細(xì)胞相對抑制率隨著含藥血清濃度的增大而增加，當(dāng)含藥血清達(dá)到一定濃度后，細(xì)胞相對抑制率隨著血清濃度的增加而下降。各實(shí)驗(yàn)加藥組中細(xì)胞生長抑制率與空白

4、對照組相比，均有顯著性差異．以氟尿嘧啶組、消瘤湯中劑量組較空白對照組細(xì)胞生長抑制率增高顯著。 3、流式細(xì)胞儀檢測凋亡峰，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在G1期前出現(xiàn)凋亡峰，凋亡峰隨著含藥血清濃度的增加先升高后下降，顯示量效關(guān)系，各實(shí)驗(yàn)組之間相比較，相同培養(yǎng)時間中，以氟尿嘧啶組、消瘤湯中劑量組細(xì)胞凋亡峰最高，而空白對照組細(xì)胞始終無凋亡峰出現(xiàn)。同一實(shí)驗(yàn)組，細(xì)胞凋亡百分率隨著藥物作用時間的增加而增加，顯示時效關(guān)系，培養(yǎng)48小時作用明顯。各實(shí)驗(yàn)加藥組中細(xì)胞

5、凋亡率與空白對照組相比，均有顯著性差異。 4、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞周期均出現(xiàn)明顯改變，與空白對照組相比，均有顯著性差異。表現(xiàn)為實(shí)驗(yàn)組中G1期，S期變化不明顯，G2～M期細(xì)胞明顯增加。以氟尿嘧啶組、消瘤湯中劑量組細(xì)胞周期變化顯著。 結(jié)論： 1、消瘤湯能可抑制人肝癌細(xì)胞Bel-7402生長增殖，并呈現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)。 2、消瘤湯可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞Bel-7402凋亡。 3、消瘤湯誘導(dǎo)肝癌