大棗多糖提取與丹皮酚胂衍生物聯(lián)合抗腫瘤的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本課題以大棗多糖提取物（JPS）和丹皮酚胂衍生物2-甲氧基-4-羥基-5-乙酰基偶氮苯-4'-胂酸（R2）為藥物，研究其單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用體內(nèi)外抗腫瘤作用，并觀察這兩種藥物之間是否存在協(xié)同效應(yīng)。 方法：(1)水浴浸漬大棗，提取物經(jīng)負(fù)壓濃縮后，用乙醇沉淀獲得粗糖，再經(jīng)過脫脂、脫蛋白、脫色等初步純化后，進(jìn)一步運(yùn)用DEAE-纖維素進(jìn)行多糖分離。 (2)在體外通過MTT法檢測JPS和R2單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對人肝癌細(xì)胞株HepG-2

2、增殖與活力的影響；用細(xì)胞形態(tài)學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡及其周期的變化。 (3)在體內(nèi)以S180荷瘤鼠模型來評估抗腫瘤效應(yīng)。采用單獨(dú)給藥和聯(lián)合給藥的方式治療腫瘤，療程結(jié)束后，處死小鼠并稱體重，摘取眼球吸取血液用于計(jì)數(shù)白細(xì)胞和血小板；剝離腫瘤、心、肝、腎、脾和胸腺，稱重后計(jì)算腫瘤抑瘤率，脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和肝指數(shù)。病理切片檢查藥物對腫瘤和內(nèi)臟的損傷，電鏡分析部分腫瘤凋亡或壞死狀況。 結(jié)果：(1)大棗粗糖用石油醚脫脂、酶-三

3、氯乙酸-正丁醇聯(lián)合應(yīng)用脫蛋白、H2O2脫色和乙醇沉淀。采用DEAE-纖維素層析，蒸餾水和0～1.0mol/L的乙酸鈉分別洗脫分離，獲得大棗中性多糖(JPS-N) 和酸性多糖（JPS-A）兩大組分。 (2)JPS和R2單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用均可明顯抑制HepG-2細(xì)胞增殖，且具有濃度-時(shí)間效應(yīng)；JPS和R2單獨(dú)或聯(lián)合作用均可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，但聯(lián)合應(yīng)用未見細(xì)胞凋亡有顯著性增加。 (3) 以小鼠的體重變化、肝臟指數(shù)、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)及外

4、周血白細(xì)胞和血小板數(shù)來觀察指標(biāo)，觀察藥物對荷瘤小鼠的毒副作用。結(jié)果顯示，JPS對上述各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著增加作用，而且JPS可對抗R2引起的白細(xì)胞和血小板減少現(xiàn)象。病理切片檢查發(fā)現(xiàn)，JPS和R2均可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞壞死，但R2對小鼠肝、腎有較大的毒副作用。電鏡檢查部分腫瘤組織，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮或在核邊緣形成不規(guī)則的新月型和胞膜完整的凋亡小體。協(xié)同實(shí)驗(yàn)表明JPS能明顯改善R2治療荷瘤鼠引起的不良影響。 結(jié)論：研究顯示JPS和R