胃癌相關(guān)基因ELCOX3的克隆及序列分析.pdf

1、胃癌是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，但是迄今為止，胃癌的具體發(fā)病機(jī)制仍尚未完全闡明。因此胃癌相關(guān)基因的克隆與功能研究，對(duì)闡明胃癌的發(fā)病機(jī)制、探討有效的探針對(duì)胃癌的防治措施都有著重要的理論和實(shí)踐意義。有研究報(bào)道腫瘤中在染色體1p35-36發(fā)現(xiàn)高頻率LOH(loss of heterozygosity,LOH)，這強(qiáng)烈提示該染色體區(qū)域存在未被克隆的腫瘤相關(guān)基因。Igarashi等通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)胃癌在該染色體區(qū)域存在高頻率的LOH，并認(rèn)為該區(qū)域LO

2、H在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)我們對(duì)該區(qū)域一個(gè)EST片段MDSCBC11所代表的新基因進(jìn)行克隆，獲得其cDNA全長(zhǎng)序列，應(yīng)用生物信息學(xué)對(duì)該基因進(jìn)行初步分析。
　　方法：
　　1、運(yùn)用5'RACE和3'RACE法確定MDSCBC11所代表基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和全長(zhǎng)。
　　2、運(yùn)用Northern-bot確定MDSCBC11所代表基因轉(zhuǎn)錄本的大小和分布。
　　3、通過生物信息學(xué)方法分析MDSCBC11所代表基

3、因的功能進(jìn)行初步分析。
　　結(jié)果：
　　1、5'RACE結(jié)果發(fā)現(xiàn)90bp5'RACE接頭之后的堿基是A，從而確定MDSCBC11所代表基因的轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)為A,將該轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)A設(shè)為+1，該轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)位于翻譯位點(diǎn)前8bp處
　　2、5'RACE和3'RACE結(jié)果發(fā)現(xiàn)ELCOX3所代表基因的全長(zhǎng)為822bp。
　　3、用ɑ-32P-dCTP標(biāo)記ELCOX3所代表的基因cDNA片段，與4種成人組織的多組織Northern印

4、跡膜雜交。結(jié)果表明，該基因在肝、腦、腎、肺中都有表達(dá)，在腎中表達(dá)最高，肺中表達(dá)最低，在腎和肝中有兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本。轉(zhuǎn)錄本大小為0.8kb，與5'RACE和3'RACE結(jié)果所獲得的基因全長(zhǎng)cDNA大小一致。
　　4、該基因cDNA序列全長(zhǎng)為822bp閱讀框架位于第8-793位之間，編碼261個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)的分子量為29.97 kDa，該基因定位于線粒體。ExPASy服務(wù)器和NCBI的Blast軟件的分析結(jié)果表明，MDSCBC11所代表的基