去甲腎上腺素對(duì)血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化和增殖的影響及機(jī)制研究.pdf

1、本課題通過研究NE對(duì)血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化和增殖的影響及作用機(jī)制，為進(jìn)一步探討神經(jīng)因素對(duì)VSMC表型轉(zhuǎn)化和增殖作用打下基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法： 取健康SD大鼠腹主動(dòng)脈作原代培養(yǎng)，用第五代的細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)一：實(shí)驗(yàn)分為A：正常對(duì)照(control)組：B：NE(5×10-5mol/L)作用組；C：NE+OX-LDL(5×10-5mol/L、50ug/ml)作用組；D：OX-LDL(50ug/ml)作用組。用0.5％血清饑餓同步化

2、24小時(shí)后，各組換成無血清培養(yǎng)液并分別加入相應(yīng)藥物，作用24小時(shí)后收集細(xì)胞。用于免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)的細(xì)胞，取出前24小時(shí)用5-Brdu(8×10<'-4>mol/1)標(biāo)記，其它用于RT-PCR檢測(cè)SM22amRNA和HRG-1mRNA的表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)二：實(shí)驗(yàn)分為A：72小時(shí)對(duì)照組；B：正常對(duì)照(control)組；C：NE(5×10-5mol/L)作用組：D：NE+OX-LDL(5×10-5mol/L、50ug/ml)作用組；E：O

3、X-LDL(50ug/ml)作用組。用0.5％血清饑餓同步化24小時(shí)后，各組換成10％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)72小時(shí)后，棄培養(yǎng)液換成無血清培養(yǎng)液(此時(shí)72小時(shí)對(duì)照組終止培養(yǎng)收集細(xì)胞)，在C、D、E組中分別加入相應(yīng)藥物，作用48小時(shí)后收集細(xì)胞，其它用于RT-PCR檢測(cè)SM22amKNA和HRG-2mRNA的表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)三：實(shí)驗(yàn)分為A：正常對(duì)照(control)組：B：al-R<'->(10<'-4>mol/l)＋NE(5×10

4、<'-4>mol/l)作用組；C：β1-R<'->(10<'-4>,ol/l)+NE(5× 10<'-4>mol/l)作用組；D：NE(5 ×10<'-4>mol/l)作用組。用0.5％血清饑餓同步化24小時(shí)后，各組換成無血清培養(yǎng)液并分別加入相應(yīng)藥物，作用24小時(shí)后收集細(xì)胞。用于免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)的細(xì)胞，取出前24小時(shí)用5-Brdu(8×10<'-4>mol/l) 標(biāo)記，其它用于其它用于RT-PCR檢測(cè)SM22amRNA和HRG-1mRN

5、A的表達(dá)。 結(jié)果： 1．NE對(duì)血管平滑肌增殖的作用NE和OX-LDL作用收縮型平滑肌細(xì)胞后，有下調(diào)HRG-1基因的表達(dá)，兩者共作用下調(diào)更明顯；Brdu標(biāo)記也見其標(biāo)記增殖細(xì)胞增多；而當(dāng)NE和OX-LDL作用合成型平滑肌細(xì)胞時(shí)，NE能上調(diào)HRG-1基因，而OX-LDL則不能。這一結(jié)果表明NE對(duì)血管平滑肌的增殖有調(diào)控作用，而OX-LDL對(duì)平滑肌的增殖作用是不可逆的。而al-R<'->+NE和β1-R<'->+NE組HRG-1mRNA的

6、表達(dá)與NE作用組相比明顯增多，Brdu標(biāo)記增殖平滑肌細(xì)胞也大大減少，說明NE引起的血管平滑肌增殖是通過al-R和Bl-R起作用。 2．NE對(duì)血管平滑肌表型轉(zhuǎn)化的作用正常血管平滑肌都表達(dá)SM22a tuRNA，NE和OX-LDL作用收縮型血管平滑肌后，SM22a mRNA表達(dá)都下調(diào)。而NE和OX-LDL作用合成型血管平滑肌時(shí)，NE對(duì)SM22a mRNA的表達(dá)有明顯上調(diào)作用，OX-LDL則沒有上調(diào)作用，這一點(diǎn)與對(duì)平滑肌的增殖作用是相

7、吻合的；OX-LDL對(duì)合成型平滑肌的表型轉(zhuǎn)化作用也是不可逆的。 結(jié)論： 1．NE可促收縮型血管平滑肌表型向合成型轉(zhuǎn)化和增殖作用；對(duì)合成型血管平滑肌表型轉(zhuǎn)化和增殖作用有回調(diào)作用，說明NE具有象神經(jīng)調(diào)控樣的可逆性調(diào)控作用。 2．OX-LDL可促收縮型血管平滑肌表型向合成型轉(zhuǎn)化和增殖作用；對(duì)合成型血管平滑肌表型轉(zhuǎn)化和增殖沒有看到象NE的回調(diào)作用，說明OX-LDL對(duì)血管是一種不可逆的作用。 3．通過阻斷a1-R和