乙肝病毒表面抗原基因植物表達載體的構(gòu)建及其在煙草和苜蓿中的表達.pdf

1、目前，利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)藥用外源蛋白已經(jīng)成為低成本、大規(guī)模進行生物藥物研究的主要思路之一。通過構(gòu)建含有乙肝病毒表面抗原基因（HBsAg）的植物表達載體，并將其分別在煙草和苜蓿中表達，理論上，可以克服傳統(tǒng)的通過酵母表達系統(tǒng)得到乙肝疫苗生產(chǎn)過程中的工藝復(fù)雜、需要專門純化設(shè)備以及成本較高的問題，為研制經(jīng)濟方便的口服乙肝疫苗提供了解決方法。
　　 本文針對植物中表達HBsAg表達量低的問題，以構(gòu)建復(fù)合式啟動子的方法，利用煙草及苜蓿轉(zhuǎn)基因

2、探索其提高植物轉(zhuǎn)基因表達量的可能性。本研究以植物表達載體pBI121為母核，利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建含有串聯(lián)CaMV35S增強子的2EP啟動子、HBsAg目的基因及NOS終止子表達盒的重組植物表達載體，利用液氮凍融法轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒pBI121-2EP至根癌農(nóng)桿菌EHA，獲得植物遺傳轉(zhuǎn)化工程菌pBI121/EHA；利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化煙草和苜蓿葉片外植體，在選擇培養(yǎng)基上進行抗性篩選，經(jīng)分化、壯大、生根等不同條件培養(yǎng)基培育，獲得煙草和苜蓿的