離體大鼠肝臟灌流液蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、離體大鼠肝臟灌流是一項廣泛應(yīng)用于肝臟生理功能研究的技術(shù)，在合適的灌流條件下，灌流肝臟可在一定的時間窗內(nèi)保持結(jié)構(gòu)完整。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)具有大規(guī)模、高通量的特點。本論文第一部分將這兩種技術(shù)結(jié)合，嘗試在器官水平上全面完整地研究肝臟的分泌功能。在該類型研究中，主要有兩大問題：一是如何保持肝臟器官的結(jié)構(gòu)完整，二是控制灌流液中的血污染。我們一方面調(diào)整并控制了器官灌流條件來減少灌流損傷和降低血污染，另一方面以灌流液中的谷_內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶量來評判肝臟損傷情況，

2、以灌流液中的免疫球蛋白IgG量作為灌流液血污染程度的指標。我們選取谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平較低和肉眼觀沒有明顯血污染的灌流液進行了后續(xù)研究。同時Western Blot和后續(xù)的質(zhì)譜鑒定均顯示灌流液中的IgG水平較低，提示灌流液中血污染較少。
　　 應(yīng)用二維毛細管液相色譜（強陽+反相）與質(zhì)譜聯(lián)用方法，在鑒定假陽性率約1％的基礎(chǔ)上，共獲得了886個灌流液蛋白鑒定。在這些蛋白中有423個蛋白被Swiss-Prot注釋，其中分泌蛋白的比例相對于肝

3、臟全組織蛋白組數(shù)據(jù)有高達5倍的富集；在富集指數(shù)方法富集的部分，分泌蛋白的比例則有約10倍的富集。應(yīng)用信號肽預(yù)測方法和富集指數(shù)方法，我們共獲得357個可能分泌蛋白，其中有49個非經(jīng)典途徑分泌蛋白被富集指數(shù)方法以較高可信度富集。在這些分泌蛋白中，我們發(fā)現(xiàn)有71個蛋白參與信號傳導(dǎo)通路，其中61個蛋白在胞外發(fā)揮作用。通過對這些蛋白的功能分析，我們實現(xiàn)了在器官水平和蛋白質(zhì)組學(xué)廣度上研究肝臟分泌功能。
　　 灌流液含有在灌流條件下器官水平的

4、組織間隙液蛋白，其富含疾病標志物。正常大鼠肝臟灌流液蛋白中胞內(nèi)蛋白部分為肝臟灌流損傷所致。在這些蛋白中，我們發(fā)現(xiàn)許多蛋白有文獻報道與損傷相關(guān)或已為肝臟損傷標志物。我們認為在離體器官灌流液中尋找潛在的標志物而在血液或尿液中進行驗證，可能是尋找疾病標志物的較好策略。在論文的第二部分，我們建立了Walker-256腫瘤細胞肝臟轉(zhuǎn)移模型，通過比較模型組與對照組之間的離體大鼠肝臟灌流液的差異，獲得了該腫瘤細胞轉(zhuǎn)移后肝臟灌流液中的差異蛋白。結(jié)果顯示