優(yōu)化法去細胞神經(jīng)移植修復大鼠坐骨神經(jīng)缺損的研究.pdf

1、周圍神經(jīng)損傷后，如果游離神經(jīng)斷端仍達不到無張力縫合，則需進行自體神經(jīng)移植，它被認為是修復周圍神經(jīng)缺損的金標準。但自體神經(jīng)來源有限并增加手術部位和創(chuàng)傷，造成來源神經(jīng)支配區(qū)的功能障礙，所以需要等效于自體神經(jīng)的理想神經(jīng)移植物。同種異體或異種新鮮神經(jīng)移植會因免疫排斥反應而失敗，許旺細胞及組織間隙細胞、髓鞘是排斥反應的主要標靶，其它成分抗原性則非常弱。因此去除細胞及髓鞘等成分就能極大地降低其免疫原性，有效抑制免疫排斥反應。去細胞的方法較多，其中應

2、用較多的有熱法及化學法。但前者只是殺死細胞并不能去除細胞殘留物從而不能較好地消除免疫原性，后者雖然能較徹底去除細胞碎片，但卻對細胞外基質損傷較大，破壞了移植物的空間結構，而移植物的空間結構及某些天然組織蛋白對促進神經(jīng)再生非常重要。針對此問題，Hudson等人開發(fā)了優(yōu)化的去細胞方法。應用此優(yōu)化方法處理同種異體神經(jīng)，既清除了細胞、髓鞘及其崩解碎片，基本消除了神經(jīng)移植物抗原性，同時很好地保留了神經(jīng)的基管膜及板層結構而成為神經(jīng)纖維再生的良好支架

3、，使其具有與自體神經(jīng)近似的引導神經(jīng)再生的功能。然而其體內研究仍較初步且未對術后動物的功能恢復情況進行監(jiān)測。而臨床上同種異體神經(jīng)來源也很有限，運用異種神經(jīng)則不僅能解決來源問題，且不會產(chǎn)生倫理學問題。Hudson等人并未對優(yōu)化法處理的異種神經(jīng)移植修復大鼠坐骨神經(jīng)缺損后的抗免疫排斥和促神經(jīng)再生能力進行研究，若本實驗發(fā)現(xiàn)優(yōu)化法處理的異種神經(jīng)修復神經(jīng)缺損的能力與自體神經(jīng)和去細胞同種異體神經(jīng)相似將具有較大的臨床意義。 因此，本研究通過應用優(yōu)

4、化去細胞（Optimized acellular，OA）方法處理的同種異體（大鼠）及異種（兔）神經(jīng)移植物移植修復大鼠坐骨神經(jīng)缺損，術后檢測實驗動物移植物局部的免疫排斥情況、患肢功能恢復及神經(jīng)再生情況，并將三種不同移植物的修復結果相互對比，來觀察優(yōu)化去細胞方法抑制免疫排斥、促神經(jīng)再生及功能恢復的有效性，探討同種異體及異種神經(jīng)移植作為自體神經(jīng)移植替代療法的可能性。 首先，進行神經(jīng)移植物制備及神經(jīng)移植手術。參照Hudson等的優(yōu)化去細

5、胞方法處理所取兔臂叢神經(jīng)分支和大鼠坐骨神經(jīng)，然后分別移植修復大鼠1cm坐骨神經(jīng)缺損，以自體神經(jīng)移植和新鮮兔、大鼠神經(jīng)移植作為對照。然后，分別于術后1個月和3個月行大體觀察、坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（sciatic functional index,SFI）測量、神經(jīng)電生理檢測和組織學觀察。 研究結果顯示：術后1個月，自體神經(jīng)、OA異體神經(jīng)和OA異種神經(jīng)移植組動物的坐骨神經(jīng)功能恢復相似，大體觀察亦無顯著差異，但均優(yōu)于新鮮神經(jīng)移植組。電生理

6、檢測結果說明三組動物移植神經(jīng)均已恢復電傳導能力，在傳導速度上差異無統(tǒng)計學意義，但均未恢復到正常神經(jīng)水平。組織學觀察則顯示三組再生神經(jīng)纖維均連續(xù)性良好，雪旺氏細胞在數(shù)量、形態(tài)和排列等方面無明顯差異。巨噬細胞和CD8+T細胞免疫組化染色顯示它們在染色陽性面積百分比上無明顯差異，卻顯著低于新鮮神經(jīng)移植組，直觀地證明了優(yōu)化去細胞方法有效抑制宿主免疫排斥反應的能力。3個月取材與1個月取材時相比，移植段神經(jīng)的大體外觀、電生理及組織學觀察結果均無明顯

7、差異，但坐骨神經(jīng)功能指數(shù)卻明顯優(yōu)于后者，可能是因為術后1個月時，再生神經(jīng)纖維已經(jīng)通過移植段神經(jīng)并長入遠端，神經(jīng)電傳導能力已經(jīng)恢復，故與3個月時相比，電生理及組織學觀察結果無顯著差異，如移植物中段軸突密度等指標。而隨著時間推移，神經(jīng)纖維向遠端延伸，重建運動終板等結構，恢復對肌肉的支配，因此坐骨神經(jīng)功能指數(shù)優(yōu)于1個月時。 由于用天然神經(jīng)代替人工材料移植修復周圍神經(jīng)缺損具有許多先天性優(yōu)點，如完全天然的空間結構，以及軸突生長時會對神經(jīng)移

8、植物內的基膜管等具有傾向性等，因此，優(yōu)化去細胞方法處理的天然神經(jīng)移植物不僅有效解決了宿主免疫排斥的問題，還能提供較理想的促神經(jīng)再生能力。 本研究表明：用此方法處理的同種異體神經(jīng)修復周圍神經(jīng)缺損效果較好，有望代替應用受限的自體神經(jīng)。而此法處理的異種神經(jīng)移植物則可以比擬自體神經(jīng)和同樣方法處理的同種異體神經(jīng)移植物，且在供體來源和倫理學等方面甚至優(yōu)于后兩者，因此臨床應用異種神經(jīng)移植物修復周圍神經(jīng)缺損，特別是大段、多段或神經(jīng)叢缺損是可行的