FAP-α介導(dǎo)的酶激活式抗腫瘤前體藥物的體外藥效學(xué)研究.pdf

1、現(xiàn)今臨床常用的抗腫瘤手段主要以化療為主，其中多數(shù)藥物對(duì)腫瘤組織缺乏選擇性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)常不可避免地?fù)p傷正常細(xì)胞，從而導(dǎo)致毒副作用發(fā)生。因此，提高藥物與腫瘤局部的接觸可改善治療效果，其中一種有效的方法是合成只有在腫瘤局部才能被激活的前體藥物。 成纖維細(xì)胞活化因子-α(Fibroblast Activation Protein-α，F(xiàn)AP-α)是特異性表達(dá)于腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAF)表面的抗原分子，故將FAP-α作為腫瘤靶

2、向治療的靶標(biāo)具有可行性。FAP-α具有腫瘤間質(zhì)特異性高表達(dá)的特性和肽鍵專性肽鏈內(nèi)切酶活性，利用FAP-a的專一性底物N．芐氧基羰基．甘氨酰脯氨酸為導(dǎo)向載體，將其游離羧基對(duì)阿霉素的游離氨基進(jìn)行?；纯珊铣蓴y帶有FAP-a選擇性水解的二肽結(jié)構(gòu)的酶激活式前體藥物Z-GP-Dox，該前體藥物的設(shè)計(jì)策略可為實(shí)現(xiàn)抗腫瘤藥物靶向性治療提供可能。本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)抗腫瘤前體藥物Z-GP-Dox的體外藥效學(xué)特性進(jìn)行了研究。 目的：體外檢測(cè)FAP-α介

3、導(dǎo)的酶激式靶向抗腫瘤前體藥物Z-GP-Dox的細(xì)胞毒性、酶激活式靶向性釋放特性及血清穩(wěn)定性，為進(jìn)一步開(kāi)展體內(nèi)及臨床靶向性抗腫瘤藥物試驗(yàn)提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1、驗(yàn)證細(xì)胞及組織中FAP-α的表達(dá)利用RT-PCR、Western Blotting及免疫組織化學(xué)法檢測(cè)EF細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞、正常組織及腫瘤組織中FAP-α的表達(dá)。 2、檢測(cè)前體藥物的細(xì)胞毒性MTT法檢測(cè)前體藥物與母體藥物對(duì)阿霉素(Dox)敏感細(xì)

4、胞株K562細(xì)胞及MOLT-4細(xì)胞的毒性。 3、檢測(cè)FAP-α特異性酶切后前體藥物細(xì)胞毒性的改變將前體藥物Z-GP-Dox分別與FAP-α表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞-EF細(xì)胞(胚胎成纖維細(xì)胞)及FAP-α表達(dá)陰性細(xì)胞-MCF-7細(xì)胞共孵育不同時(shí)間，將孵育后的上清作用于K562細(xì)胞及MOLT-4細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。 4、驗(yàn)證FAP-α對(duì)前體藥物水解的特異性FAP-α特異性自身抗體與EF細(xì)胞共孵育24、48小時(shí)后，再與前體藥物Z

5、-GP-Dox繼續(xù)共孵育24小時(shí)，最后將共孵育上清作用于K562細(xì)胞，MTT法檢測(cè)上清對(duì)K562細(xì)胞的毒性。 5、檢測(cè)前體藥物的血清穩(wěn)定性前體藥物Z-GP-Dox與正常人或腫瘤患者血清共孵育不同時(shí)間，然后將孵育上清作用于K562細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。 結(jié)果： 1、FAP-α在EF細(xì)胞及乳腺癌組織中表達(dá)陽(yáng)性，而在體外培養(yǎng)的MCF-7細(xì)胞及正常組織中表達(dá)陰性。 2、與Dox相比，前體藥物Z-GP-Do

6、x對(duì)K562細(xì)胞的毒性下降至1/4～1/14，對(duì)MOLT-4細(xì)胞的毒性下降至1/9～1/22。 3、Z-GP-Dox與EF細(xì)胞共孵育后細(xì)胞毒性明顯增強(qiáng)，而與MCF-7共孵育后細(xì)胞毒性未明顯增強(qiáng)。 4、經(jīng)FAP-α特異性抗體封閉后可明顯阻斷EF細(xì)胞誘導(dǎo)的Z-GP-Dox的細(xì)胞毒性釋放。 5、前體藥物與正常人或腫瘤患者血清共孵育后其細(xì)胞毒性未明顯改變。 結(jié)論： 1)Z-GP-Dox是利用FAP-α的專