安定對(duì)新生大鼠缺血缺氧性腦損傷保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、新生兒缺血缺氧性腦損傷(hypoxia ischaemia brain damage，HIBD)是指圍產(chǎn)期新生兒窒息引起的腦部綜合征，?？梢鸩豢赡娴哪X組織損傷和一系列神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，是新生兒病死及發(fā)生神經(jīng)系統(tǒng)殘疾的主要原因之一。
　　目的：在本研究中，探討安定對(duì)缺血缺氧性腦損傷新生大鼠的近遠(yuǎn)期腦保護(hù)作用，并對(duì)安定可能的腦保護(hù)作用新機(jī)制進(jìn)行了初步探討，為臨床治療HIBD提供參考。
　　方法：7日齡新生Sprague-Dawl

2、ey(SD)大鼠，隨機(jī)分為三組（每組20只）:假手術(shù)組(Sham)、缺血缺氧模型組(HIBD)和安定治療組(Diazepam)。HIBD模型組參照經(jīng)典Rice-Vannucci法制作HIBD模型;假手術(shù)組僅游離出左側(cè)頸總動(dòng)脈，不做缺血缺氧處理。模型制備成功后安定治療組立即腹腔注射劑量為10mg.kg-1.8h-1的安定，連續(xù)給藥3天;其他兩組給予相同劑量的生理鹽水。通過氯化2，3，5-三苯基四氮唑(2，3，5-triphenyltetr

3、azoliumchloride，TTC)染色以及自主活動(dòng)和Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)來(lái)探討安定對(duì)新生HIBD大鼠的近遠(yuǎn)腦期保護(hù)作用。同時(shí)，通過Real-timePCR、Western-blot以及免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)KCC2mRNA、KCC2蛋白水平的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　(1)新生大鼠HIBD模型的鑒定:新生大鼠缺血缺氧完成后，動(dòng)物出現(xiàn)明顯的左旋癥狀，說(shuō)明HIBD模型建立成功。
　　(2)TTC染色結(jié)果顯示:HI

4、BD模型組有大面積的白色腦梗死區(qū)域，再次說(shuō)明HIBD模型的制備是成功的。與HIBD模型組相比，安定治療組的腦梗死區(qū)域明顯減少(P＜0.01)，提示安定對(duì)于HIBD新生大鼠有一定的近期腦保護(hù)作用。
　　(3)自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:和假手術(shù)組相比，HIBD模型組的活動(dòng)明顯減少(P＜0.05)，給予安定治療后活動(dòng)有所增加，但無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　(4)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在定位航行試驗(yàn)中，5天總平均逃避潛伏

5、期為HIBD組＞安定治療組＞假手術(shù)組，從第三天開始各組之間相比結(jié)果有差異(P＜0.05orP＜0.01);在空間探索試驗(yàn)中，HIBD模型組大鼠的目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比和穿越站臺(tái)次數(shù)明顯減少，給予安定治療后有一定的改善(P＜0.05orP＜0.01)。說(shuō)明HIBD后大鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降，安定治療能夠減輕HIBD對(duì)遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶能力的損害。
　　(5)RT-PCR、Western-blot以及免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:KCC2-mRAN

6、和蛋白表達(dá)水平在HIBD后顯著下調(diào)(P＜0.05orP＜0.01)，給予安定治療后有一定的提高。
　　結(jié)論：
　　(1)早期給予安定治療可以明顯減少HIBD新生大鼠的腦梗死體積，表明安定對(duì)HIBD損傷有一定的早期保護(hù)作用;
　　(2)早期給予安定治療可以明顯改善HIBD新生大鼠的自主活動(dòng)能力和空間學(xué)習(xí)記憶能力，表明安定可以改善遠(yuǎn)期神經(jīng)系統(tǒng)預(yù)后;
　　(3)安定通過阻止KCC2在mRAN和蛋白水平上表達(dá)的下降，從而