Ad-PUMA用于腫瘤基因治療的可行性研究.pdf

1、惡性腫瘤嚴(yán)重威脅人類健康，亟需發(fā)展多種治療方法改善腫瘤的預(yù)后。PUMA(p53up-regulatedmodulatorofapoptosis)是2001年報(bào)道發(fā)現(xiàn)的具有快速強(qiáng)大促凋亡作用的p53下游基因。本研究旨在探討載有PUMA的復(fù)制缺陷型腺病毒(Ad-PUMA)用于治療惡性腫瘤的可行性，檢測(cè)Ad-PUMA與化療藥合用對(duì)腫瘤細(xì)胞的增效作用及可能機(jī)制，并與Ad-p53進(jìn)行比較。結(jié)果表明在p53狀態(tài)不同的食管癌細(xì)胞系、HPV狀態(tài)不同的宮

2、頸癌細(xì)胞系中，Ad-PUMA均比Ad-p53顯現(xiàn)更強(qiáng)大的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用；Ad-PUMA在多種組織來源的腫瘤細(xì)胞中可增強(qiáng)化療藥的療效；在人食管癌細(xì)胞系KYSE150細(xì)胞中證實(shí)Ad-PUMA與化療藥物合用有協(xié)同作用，裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Ad-PUMA比Ad-p53化療增效作用更強(qiáng)。外源PUMA的導(dǎo)入不影響化療藥對(duì)細(xì)胞周期造成的改變，但可加強(qiáng)化療藥誘導(dǎo)的凋亡。PUMA的促凋亡作用是通過誘導(dǎo)Bax寡聚化、激活Caspase9實(shí)現(xiàn)的，Bcl-

3、2高表達(dá)可減弱Ad-PUMA對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。 廣泛用于基因治療的腺病毒載體Ad5和Ad2主要通過柯薩奇腺病毒受體(coxsackieadenovirusreceptor，CAR)感染宿主細(xì)胞。CAR在不同腫瘤細(xì)胞膜上的表達(dá)水平并不相同，這種差異有可能影響腺病毒的感染效率。本研究通過熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)載有綠色熒光蛋白的Ad5型腺病毒Ad-GFP對(duì)不同種、甚至同種上皮來源的惡性腫瘤細(xì)胞系的感染效率差異較大，感染效率