蛋白激酶C與早期糖尿病視網(wǎng)膜病變關(guān)系的實(shí)驗研究.pdf

1、目的：通過體外及體內(nèi)實(shí)驗探討早期糖尿病狀態(tài)對于蛋白激酶C(PKC)表達(dá)的影響，以及PKC的激活與內(nèi)皮素(endothelin，ET)系統(tǒng)、血-視網(wǎng)膜屏障(BRB)破壞的關(guān)系，并采用PKC抑制劑進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗。方法：采用體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(，HUVEC)及鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的早期糖尿病大鼠模型，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定細(xì)胞膜和細(xì)胞漿PKC活性以及大鼠視網(wǎng)膜和玻璃體血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)蛋白的濃度，半定量逆轉(zhuǎn)

2、錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定HUVEC細(xì)胞ET-1、VEGFmRNA和大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)ET-1、ET-3、受體ET-A和ET-B以及VEGFmRNA的表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色測定HUVEC細(xì)胞ET-1和VEGF的表達(dá)，免疫組織化學(xué)染色測定視網(wǎng)膜及視網(wǎng)膜血管組織內(nèi)ET-1的表達(dá)，伊凡思藍(lán)(EvansBlue，EB)作為示蹤物定量測定大鼠BRB破壞，同時觀測PKC抑制劑GF109203X對高糖培養(yǎng)基中的HUVEC細(xì)胞VEGF和ET-1mRN

3、A及蛋白表達(dá)的影響，并通過玻璃體內(nèi)給予PKC抑制劑GF109203X后觀測對糖尿病大鼠ET系統(tǒng)、VEGF以及BRB的影響。結(jié)論：(1)高葡萄糖狀態(tài)下，不僅可導(dǎo)致早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜PKC的激活，而且可使體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞中的PKC激活，高葡萄糖水平是導(dǎo)致PKC激活的重要原因。(2)糖尿病狀態(tài)下，對視網(wǎng)膜ET系統(tǒng)的影響主要表現(xiàn)在ET-1表達(dá)的增加，視網(wǎng)膜內(nèi)ET-1表達(dá)增加可能是糖尿病早期PKC激活所導(dǎo)致的視網(wǎng)膜內(nèi)血流量下降的重要原因之