加味四物湯水提物對心肌梗死后心功能、心室重構(gòu)、血管新生和骨髓細(xì)胞動員的影響.pdf

1、目的：觀察加味四物湯水提物（modifiedSiwutang，mSWT）對心肌梗死大鼠心功能和心室重構(gòu)的影響，并在此基礎(chǔ)上觀察藥物對血管新生、骨髓細(xì)胞動員的影響，以明確mSWT對心肌梗死的治療作用和作用機制。方法：運用加熱回流提取制各加味四物湯水提物，減壓冷凍干燥制成凍干粉，紫外分光光度法分析測定總皂苷和多糖含量。SD雄性大鼠，隨機分成假手術(shù)組（sham）、模型組（model）、mSWT低、高劑量組（mSWT-L，mSWT-H），冠狀動

2、脈結(jié)扎法建立大鼠心肌梗死模型，5-溴脫氧尿核苷（5-bromodeoxyuridine，BrdU）標(biāo)記脛骨骨髓腔骨髓細(xì)胞。造模后第1d開始灌胃給予mSWT，連續(xù)35d，造模后第7d、14d和35d，運用彩色多普勒超聲技術(shù)檢測左心室舒張末期內(nèi)徑（leftventricularenddiastolicdimension，LVDd）、左心室收縮末期內(nèi)徑（leftventricularend-systolicdimension，LVDs）、舒張

3、末期左室容積（leftventricularend-diastolicvolume，EDV）、收縮末期左室容積（leftventricularend-systolicvolume，ESV）、左室射血分?jǐn)?shù)（leftventricularejectionfraction，EF）、左室短軸縮短分?jǐn)?shù)（leftventricularfractionalshortening，F(xiàn)S）、舒張末期左室前壁的厚度（leftventricularanteri

4、orwallthicknessend-diastolic，LVAWd）和收縮末期左室前壁的厚度（leftventricularanteriorwallthicknessend-systolic，LVAWs）。HE和Masson染色觀察左室心肌組織形態(tài)學(xué)變化。RealtimeRT-PCR檢測梗死區(qū)邊緣心肌組織中堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basicfibroblastgrowthfactor，b-FGF）和血管內(nèi)皮生長因子（vasculare

5、ndothelialgrowthfactor，VEGF）mRNA的表達；免疫組織化學(xué)法檢測梗死區(qū)心肌組織中CD31陽性微血管數(shù)目及BrdU陽性細(xì)胞定植情況。雄性昆明小鼠，隨機分成正常對照組（control）、模型組（model）和mSWT低、高劑量組（mSWT-L，mSWT-H），每組10只，冠狀動脈結(jié)扎建立小鼠心肌梗死模型，第14d，HE染色觀察左心室形態(tài)學(xué)變化，流式細(xì)胞分析術(shù)檢測外周血及股骨骨髓中造血干細(xì)胞和Sca-1-CD44+C

6、D105+CD166+細(xì)胞亞群百分比。結(jié)果：紫外分光光度法測得mSWT中總皂苷含量為6.50％，多糖含量為65.60％。與模型組比較，mSWT能改善心肌梗死大鼠的一般狀況，但存活率提高不明顯。與sham組相比，model組造模后第7d、14d和35dLVDd、LVDs、EDV和ESV顯著增大（P<0.01）；LVAWd、LVAWs、EF和FS明顯減小（P<0.01），且隨時間延長上述指標(biāo)呈進行性惡化。與model組相比，mSWT-L組造

7、模后第7dLVDd，僅見ESV明顯減小（P<0.05），其余心功能指標(biāo)有改善趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義，而mSWT-H組LVDd、LVDs、EDV和ESV均明顯減小，EF和FS均明顯增大。造模后14d，mSWT-L組和mSWT-H組LVDd、LVDs、EDV和ESV均明顯減小，LVAWd、LVAWs、EF和FS均明顯增大。造模35d后，與model組相比，mSWT-L和mSWT-H組LVDs、ESV顯著減小，LVAWd、LVAWs、EF和FS

8、均顯著增大。14d和35d，mSWT高、低劑量治療組間上述指標(biāo)無顯著差異。造模后35d，心臟肉眼觀察可見，model組大鼠心臟和心室腔均變大，左心室壁變薄，HE染色和Masson染色后，顯微鏡下可見較大的心肌梗死灶和較多的纖維化瘢痕；mSWT治療后心臟和心室腔均縮小，左心室壁相對較厚，心臟梗死區(qū)縮小，梗死區(qū)可見較多心肌細(xì)胞存在，而纖維化瘢痕較少。RealTimeRT-PCR結(jié)果顯示，mSWT治療后梗死區(qū)邊緣心肌組織VEGF和b-FGFm

9、RNA的表達明顯增高（P<0.01）。免疫組織化學(xué)染色檢測結(jié)果顯示，與model組相比，mSWT治療后，梗死區(qū)及其周邊CD31陽性小血管和微血管數(shù)目顯著增加（P<0.01）。另外可見，sham組心肌組織中未見BrdU陽性表達細(xì)胞，但model組和mSWT組心肌梗死區(qū)與非梗死區(qū)交界部位均可見BrdU陽性表達細(xì)胞，mSWT治療組似有增加BrdU陽性表達細(xì)胞數(shù)量的趨勢。在小鼠冠脈結(jié)扎后14d，HE染色組織病理學(xué)結(jié)果顯示，model組左心室壁變

10、薄，梗死區(qū)面積較大，大量心肌纖維融解、破壞，出現(xiàn)纖維素樣變；與model組相比，mSWT治療后左心室壁變厚，梗死面積縮小，梗死區(qū)域有較多島狀心肌細(xì)胞存在。與sham組比，model組骨髓和外周血中Sca-1-CD44+CD105+CD166+細(xì)胞比例明顯增高（P<0.01），而Lin-Sca+CD117+（LSK細(xì)胞，即造血干細(xì)胞）有增高趨勢，無統(tǒng)計學(xué)意義。與model組相比，mSWT-L組PB中Sca-1-CD44+CD105+CD1

11、66+細(xì)胞比例顯著升高，mSWT-H組BM和PB中LSK細(xì)胞和Sca-1-CD44+CD105+CD166+細(xì)胞比例均顯著升高（P<0.01）。結(jié)論：mSWT不但可顯著改善心肌梗死大鼠心功能和左心室重構(gòu)；而且還可以上調(diào)心肌梗死區(qū)心肌組織b-FGF和VEGFmRNA的表達，增加梗死區(qū)微小血管數(shù)量，表明mSWT可促進梗死區(qū)血管新生，從而可能改善心肌微循環(huán)，這可能是其治療MI的機制之一。心肌梗死后，可使骨髓細(xì)胞向心肌梗死區(qū)遷移和定植，mSWT