殼聚糖-海藻酸鹽微球熒光標(biāo)記反應(yīng)研究.pdf

1、生物相容性、降解性?xún)?yōu)良的殼聚糖/海藻酸鹽微球載體技術(shù)成為蛋白質(zhì)藥物口服給藥系統(tǒng)發(fā)展的前沿。為了研究殼聚糖/海藻酸鈣微球在體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)、吸收與分布狀況，可以采用肝、脾等組織切片及血流變測(cè)試進(jìn)行定性與定量考察。但是由于殼聚糖、海藻酸鈉沒(méi)有明顯的顏色，微球在體檢測(cè)存在一定的困難。因此采用特定化合物．熒光素對(duì)微球進(jìn)行標(biāo)記，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)儀器檢測(cè)熒光素達(dá)到對(duì)殼聚糖/海藻酸鹽微球在體檢測(cè)目的。 本文采用異硫氰酸酯(FITC)為熒光標(biāo)記物，利用堿性條

2、件下殼聚糖2-NH2中氮原子與FITC異硫氰基上正電性碳原子發(fā)生親核加成反應(yīng)，使殼聚糖分子結(jié)合FITC。隨后，以海藻酸鈣微球?yàn)檩d藥基質(zhì)，在酸性條件下海藻酸鈣5-COO。與熒光殼聚糖2-NH<,3><'+>進(jìn)行聚電解質(zhì)絡(luò)合反應(yīng)，微球表面形成鍵合FITC的半透性控釋膜，實(shí)現(xiàn)微球的熒光標(biāo)記。系統(tǒng)考察影響微球熒光標(biāo)記的相關(guān)因素，得出優(yōu)化工藝條件。采用膨脹率表征微球膜強(qiáng)度，探討殼聚糖相關(guān)特性、反應(yīng)條件對(duì)熒光微球在口服介質(zhì)中膜強(qiáng)度的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如

3、下： 1．殼聚糖溶液pH值對(duì)熒光標(biāo)記反應(yīng)具有決定性作用。當(dāng)溶液pH>pKa(殼聚糖)時(shí)，殼聚糖熒光標(biāo)記效率顯著提高。 2． FITC上帶正電性的碳原子與海藻酸鈣凝膠珠上5-COO<'->共同競(jìng)爭(zhēng)殼聚糖的2-NH<,2>，因此殼聚糖的熒光標(biāo)記程度對(duì)微球的熒光標(biāo)記反應(yīng)有一定的負(fù)面影響。同時(shí)殼聚糖分子量、脫乙酰度、濃度、成膜時(shí)間以及海藻酸鈣凝膠珠粒徑對(duì)微球熒光標(biāo)記反應(yīng)影響顯著。采用5萬(wàn)分子量、脫乙酰度90％、溶液濃度0.01g