烏司他丁對(duì)腎缺血再灌注繼發(fā)肺損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：腎臟作為一種高灌注器官，對(duì)缺血非常敏感，在休克復(fù)蘇、腎移植和擠壓綜合征等病理狀態(tài)下容易發(fā)生缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury,IRI)。IRI不僅引起腎臟損傷，也可導(dǎo)致遠(yuǎn)隔器官的損傷，甚至多器官功能障礙綜合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS），尤其以肺損傷引起的急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndro

2、me，ARDS)最為突出。烏司他丁(Ulinastatin，UTI)是從人體尿液中分離純化出的一種典型的Kuniz型蛋白酶抑制劑，無(wú)免疫原性，主要通過(guò)抑制炎性介質(zhì)的過(guò)度釋放、穩(wěn)定溶酶體膜改善微循環(huán)和凝血功能，減少缺血組織的再灌注損傷。UTI廣泛應(yīng)用于休克，急性胰腺炎的治療，具有明顯的臟器保護(hù)功能。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠腎缺血再灌注模型，觀察烏司他丁對(duì)腎缺血再灌注損傷后遠(yuǎn)隔器官肺的保護(hù)作用，探討其對(duì)腎缺血再灌注肺損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制：觀察分

3、析烏司他丁對(duì)腎缺血再灌注損傷后肺保護(hù)作用的可行性，為臨床實(shí)踐提供有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 健康清潔級(jí)Wistar大鼠30只，雄性，月齡3～4月，體重250～300克（河北醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供編號(hào)：1007048）。隨機(jī)分為三組，每組10只：假手術(shù)組（S組），缺血再灌注組（I/R組），烏司他丁給藥組(UTI組)。
　　 Wistar大鼠禁食12小時(shí)，自由飲水。腹腔注射3％的戊巴比妥鈉40mg/kg麻

4、醉后，將其仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，減去腹部毛發(fā)，用碘伏消毒術(shù)野三遍，鋪無(wú)菌洞巾。經(jīng)腹正中切口入腹腔，游離腎組織，采用夾閉雙側(cè)腎蒂45min，再灌注24h制備腎缺血再灌注模型。用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)腎蒂（腎顏色迅速由紅潤(rùn)轉(zhuǎn)為蒼白、細(xì)動(dòng)脈搏動(dòng)消失證明動(dòng)脈夾閉確切），45min后經(jīng)原切口進(jìn)腹，松開(kāi)動(dòng)脈夾，恢復(fù)血供。S組僅行開(kāi)腹，游離雙腎，腎蒂不夾閉，傷口由生理鹽水紗布覆蓋，暴露45min后縫合切口。I/R組暴露腎臟后夾閉雙側(cè)腎蒂45min后開(kāi)放動(dòng)

5、脈夾，再灌注24h。UTI組在夾閉腎蒂前5min靜脈注射烏司他丁5ku/kg，余同I/R組。
　　 所有動(dòng)物均于再灌注24h后開(kāi)胸，心臟抽血，處死大鼠。收集血液標(biāo)本測(cè)定肌酐(creatinine，Cr)和尿素氮(urea nitrogen，BUN)。用比色法測(cè)定左肺組織丙二醛(malondidehyde，MDA)含量，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性，髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxida

6、se，MPO)含量。取右肺上葉透射電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)的變化，光鏡下觀察肺組織病理變化?？焖俜蛛x右肺中葉測(cè)肺干濕比。用酶聯(lián)免疫法測(cè)定大鼠右肺下葉的中TNF-α的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.術(shù)后一般情況的觀察：I/R組大鼠病態(tài)明顯，蜷縮，不活動(dòng)，飲水減少，不再合群取暖，呼吸急促，有分泌物從鼻腔溢出，眼角出現(xiàn)滲出物等。剖腹可見(jiàn)膿血性渾濁滲液。S組大鼠麻醉清醒后活動(dòng)基本正常。UTI組大鼠術(shù)后表現(xiàn)較I/R輕。
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7、.腎功能結(jié)果
　　 I/R組血清中BUN、Cr的含量較S組明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.05）；UTI組血清中的BUN、Cr的含量較I/R組降低，差異具有顯著性（P＜0.05）
　　 3.光鏡下觀察肺組織的病理變化S組肺泡間隔均勻一致，可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞，肺泡結(jié)構(gòu)基本完整，肺泡腔清晰（見(jiàn)Fig.1.2）；I/R組肺泡間隔明顯斷裂發(fā)生病理性融合，肺泡形態(tài)紊亂，可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及紅細(xì)胞滲出（見(jiàn)Fig.3，4）；UTI組

8、肺泡的病理改變較I/R組明顯減輕，肺泡間隔基本完整，可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡結(jié)構(gòu)較清晰（見(jiàn)Fig.5，6）。
　　 4.電子顯微鏡下觀察肺組織的超微結(jié)構(gòu)變化S組毛細(xì)血管基底膜及內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞呈圓形或橢圓形，胞漿豐富。板層小體結(jié)構(gòu)完整，呈圓形，有包膜，內(nèi)見(jiàn)電子密度較高并呈同心圓排列的層狀結(jié)構(gòu)；(見(jiàn)Fig.7，8)；I/R組(見(jiàn)Fig.9，10)基底膜缺失、疏松、不清楚。Ⅰ型上皮細(xì)胞嚴(yán)重水腫，Ⅱ型肺泡細(xì)胞微

9、絨毛數(shù)量顯著減少，線粒體脊斷裂或是融合消失。UTI組(見(jiàn)Fig.11，12)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)基本正常，氣血屏障稍增厚，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞板層小體及微絨毛數(shù)量減少，線粒體損傷較輕。
　　 5.肺組織濕/干比I/R組肺組織濕干比明顯高于S組（P＜0.05），UTI組肺組織濕干比明顯低于I/R組（P＜0.05）。
　　 6.酶聯(lián)免疫組化法測(cè)定大鼠肺組織中TNF-α的含量與S組比較，I/R組肺組織中TNF-α的含量明顯增高（P

10、＜0.05）；與I/R組比較，UTI組肺組織中TNF-α的含量明顯減少(P＜0.05)。
　　 7.肺組織MDA含量、SOD活性和MPO的含量變化。
　　 與S組相比，I/R組、UTI組肺組織MDA含量，MPO含量升高，SOD活性降低。（P＜0.05）
　　 與I/R組相比，UTI組的MDA含量，MPO含量降低，SOD的活性升高。(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：烏司他丁對(duì)大鼠腎缺血再灌注造成的肺損傷有較好