雞冠菌多糖提取工藝和藥理作用研究.pdf

1、雞冠菌(Laetiporus sulphureus)是一種常見的食用和藥用價值都很高的真菌。近年來，隨著藥用真菌多糖研究的不斷深入和發(fā)展，發(fā)現(xiàn)真菌多糖具有抗病毒、降血脂、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老等多種生物活性，是一種純天然無毒副作用的成分。但關(guān)于雞冠菌多糖的研究卻很少。本實驗以雞冠菌為原料，系統(tǒng)地研究了雞冠菌多糖的分離純化技術(shù)，對純化后所得最多的LSP3多糖的理化性質(zhì)和單糖組成進(jìn)行了初步探討,并對其抗氧化和降血脂的活性進(jìn)行了檢測。研究

2、的主要內(nèi)容如下：
　　1、雞冠菌多糖的熱水浸提工藝優(yōu)化
　　通過對浸提溫度、浸提時間、浸提次數(shù)、料水比、溶劑pH值進(jìn)行單因素實驗選取靈敏因素進(jìn)行正交實驗。確定熱水浸提的最佳工藝條件為：浸提時間4小時，浸提溫度90℃，浸提次數(shù)2次，料水比1：40。
　　2、雞冠菌多糖的酶解熱水浸提聯(lián)用工藝研究
　　通過對酶加入量、浸提溫度、浸提時間、料水比、酶解液pH值進(jìn)行單因素實驗選取靈敏因素進(jìn)行正交實驗。確定酶解浸提法的最佳工

3、藝條件為：酶解階段：浸提時間2小時，浸提溫度48℃，料水比1：20，加酶量：0.5％，pH值=5.5；酶解后熱水浸提階段：浸提時間2小時，浸提溫度80℃，浸提次數(shù)1次，料水比1：20。實驗結(jié)果表明酶解熱水法聯(lián)用比熱水浸提法提取雞冠菌多糖，浸提時間縮短近一半，得率提高30.15％。
　　3、乙醇沉淀工藝研究
　　通過實驗探討上述兩種方法的浸提液濃縮比和乙醇加量對多糖沉淀率的影響，結(jié)果表明熱水浸提液醇沉最佳工藝條件為濃縮液占原體

4、積的1/10，乙醇濃度為80％時，沉淀率達(dá)到90.13％。酶解加熱水浸提液醇沉最佳工藝條件為濃縮液占原體積的1/6，乙醇濃度為80％時，沉淀率達(dá)到91.43％。
　　4、除蛋白質(zhì)方法的比較
　　采用考馬斯亮藍(lán)G-250比色法測定蛋白質(zhì)含量。比較了Sevag法和酶解加Sevag法、10％三氯乙酸和鞣酸沉淀法去除雞冠菌多糖提取物中的蛋白質(zhì)。綜合考慮蛋白質(zhì)清除率和多糖損失率后確定采用酶解加Sevag法去除雞冠菌多糖提取物中的蛋白質(zhì)

5、。
　　5、大孔樹脂純化雞冠菌多糖
　　對6種大孔樹脂進(jìn)行篩選確定用AB-8大孔樹脂進(jìn)行雞冠菌多糖的純化。詳細(xì)研究AB-8大孔樹脂純化雞冠菌多糖的過程，確定條件為：洗脫速度2ml/min，NaCl溶液濃度0.2mg/ml。
　　6、雞冠菌多糖的DEAE-纖維素分離
　　取純化雞冠菌多糖上DEAE-纖維素柱，結(jié)果蒸餾水洗脫得兩種中性多糖LSP1和LSP2。0.1、0.2、0.3mol/lNaCl溶液分別洗脫得三種不

6、同的酸性多糖LSP3、LSP4和LSP5。
　　7、雞冠菌多糖的單糖組分研究
　　對DEAE-纖維素柱分離量最多的LSP3多糖采用氣相色譜法測定其單糖組分，以L-鼠李糖、D-巖藻糖、D-木糖、D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)樣品，肌醇為內(nèi)標(biāo)。測檢結(jié)果表明LSP3多糖主要由D-巖藻糖4.69％、D-半乳糖14.46％、D-甘露糖7.85％和D-葡萄糖73.00％組成。
　　8、雞冠菌多糖的抗氧化作用

7、
　　本實驗采用化學(xué)體系產(chǎn)生超氧陰離子自由基和羥自由基，研究雞冠菌多糖對這兩種自由基的清除能力。實驗表明雞冠菌多糖對超氧陰離子自由基、羥基自由基皆表現(xiàn)出很好的清除效果。100μg/ml樣品對超氧陰離子自由基（O2-·）、羥基自由基(·OH)的清除分別達(dá)到了28.19％和51.84％。
　　9、雞冠菌多糖的降血脂的作用
　　本實驗采用預(yù)防型高脂模型小鼠動物實驗。實驗表明雞冠菌多糖低劑量、中劑量、高劑量組對小鼠血清中的TC