Nrf2-Keap1-ARE信號通路在自噬調控酒精誘導肝星狀細胞增殖活化中的作用及相關機制研究.pdf

1、目的：研究自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤對酒精誘導下肝星狀細胞增殖活化的影響,并探討Nrf2-Keap1-ARE信號通路在自噬調控酒精誘導的肝星狀細胞活化中的地位,為抗酒精性肝纖維化提供新的研究思路及藥物研發(fā)靶點。
　　方法：該研究以含酒精的培養(yǎng)基處理大鼠肝星狀細胞系HSC-T6以建立體外酒精誘導肝星狀細胞活化模型;將自噬特異性抑制劑3-甲基腺嘌呤處理HSC-T6細胞,觀察自噬水平下降對肝星狀細胞活化水平及Nrf2-keap1-ARE信

2、號通路活化程度的影響;采用脂質體瞬時轉染法將構建的pEGFP-Nrf2重組質粒或合成的siNrf2片段轉染入HSC-T6細胞中,從而過上調或下調細胞內Nrf2表達水平,一方面探討Nrf2過表達對酒精刺激下肝星狀細胞活化水平的影響,另一方面通過沉默Nrf2表達以探討Nrf2在自噬調控肝星狀細胞活化機制中的地位;分別采用RT-PCR及Western blotting對HSC-T6細胞活化標志蛋白α-SMA及I-collagen mRNA及蛋

3、白表達水平進行檢測以判斷HSC-T6細胞活化水平;采用MDC染色、自噬標志蛋白LC3II及自噬特異底物P62蛋白表達檢測以判斷細胞自噬水平;采用MTT法及流式細胞術分別對HSC-T6細胞增殖水平以及細胞周期分布進行檢測。
　　結果：酒精作用下HSC-T6細胞活化水平增高,伴有細胞內自噬水平升高;3-甲基腺嘌呤作用于HSC-T6細胞后,自噬水平明顯下降且伴有細胞活化水平下降;3-甲基腺嘌呤作用于HSC-T6細胞可導致細胞內Nrf2活