GAS41在神經膠質瘤中的表達及其RNA干擾慢病毒載體的構建.pdf

1、目的：檢測膠質瘤擴增序列41(Glioma-amplifiedsequence41，GAS41)基因在不同病理級別的神經膠質瘤組織及神經膠質瘤細胞系中的表達，探討GAS41基因在神經膠質瘤發(fā)展中的作用。
　　 方法：(1)采用免疫組織化學染色法、Westernblot從蛋白水平檢測30例不同病理級別的神經膠質瘤組織中GAS41的表達情況。
　　 (2)通過Westernblot檢測神經膠質瘤細胞系中GAS41的表達情況，

2、并通過分子克隆技術構建GAS41基因的RNA干擾慢病毒載體GV118-GAS41-RNAi，連同包裝質粒pHelper1.0和包膜質粒pHelper2.0共同轉染293T包裝細胞，收集儲存可表達GAS41特異性干擾慢病毒載體的病毒顆粒并進行滴度測定。
　　 結果：(1)GAS41蛋白在高級別神經膠質瘤組織中的表達強于低級別神經膠質瘤組織，且差異有統計學意義(P=0.011<0.05)。
　　 (2)GAS41在神經膠質瘤

3、細胞系A172中表達較高，構建的GAS41干擾慢病毒載體GV118-GAS41-RNAi經PCR鑒定和測序，結果與設計序列完全相符，慢病毒重組載體構建成功，將GV118-GAS41-RNAi、pHelper1.0和pHelper2.0三質粒共同轉染293T包裝細胞后，收獲病毒并測定病毒滴度為5×108TU/ml。
　　 結論：(1)GAS41在神經膠質瘤中的表達水平隨著腫瘤惡性程度的增高而增強，提示GAS41的表達量也許可以作為