蠐螬抗腫瘤活性化學(xué)成分的篩選與分離.pdf

1、目的:
　　蠐螬在中醫(yī)臨床中有著悠久的應(yīng)用歷史,作為單味藥可治療破傷風(fēng)和眼部疾病,用在復(fù)方中可治療中風(fēng)、小兒哮喘、口瘡和血吸蟲性肝硬化。近年來,隨著人們對(duì)蠐螬的深入研究,發(fā)現(xiàn)蠐螬提取物還具有抗腫瘤、抗菌、治療眼部疾病和心腦血管保護(hù)等方面的作用,是一種極具開發(fā)價(jià)值的動(dòng)物藥。但目前有關(guān)蠐螬抗腫瘤活性成分的研究報(bào)道較少,抗腫瘤作用的物質(zhì)不明。本研究通過對(duì)蠐螬堿性部位抗腫瘤活性篩選發(fā)現(xiàn)其活性顯著,即對(duì)蠐螬堿性部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離,并對(duì)其

2、抗腫瘤方面進(jìn)行活性評(píng)價(jià),為開發(fā)和應(yīng)用蠐螬奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　采用單因素試驗(yàn)和L9(34)正交試驗(yàn)得到最佳提取蠐螬堿性部位的方法;采用MTT和荷瘤小鼠 S-180抑瘤率的方法測定蠐螬堿性部位的體內(nèi)外抗腫瘤活性;用GC-MS初步分析蠐螬堿性部位化學(xué)成分;用最優(yōu)方法所得的蠐螬堿性部位通過硅膠、葡聚糖凝膠、反相硅膠等層析柱反復(fù)柱層析得到單體化合物,通過1H-NMR、13C-NMR、MS等波譜學(xué)方法對(duì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析鑒定;采用MT

3、T法測定單體化合物對(duì)黑色素瘤B16和肝癌HepG2細(xì)胞的抗腫瘤活性。采用小鼠黑色素瘤細(xì)胞移植瘤模型,對(duì)單體化合物體內(nèi)抗腫瘤進(jìn)行評(píng)價(jià);通過檢測脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)等指標(biāo)觀察單體化合物對(duì)免疫系統(tǒng)的影響,HE染色法觀察腫瘤組織的形態(tài)學(xué)改變;TUNEL染色檢測細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:
　　蠐螬堿性部位的最佳提取工藝為蠐螬粗粉用95％乙醇浸泡提取24h,所得濾液濃縮酸化后用乙酸乙酯萃取,取水層堿化后用氯仿萃取,濃縮氯仿得蠐螬堿性部位;蠐螬

4、堿性部位體外對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有明顯抑制作用,且具有濃度依賴性,并可劑量依賴性的抑制體內(nèi)小鼠肉瘤S-180的生長;用GC-MS初步分析蠐螬堿性部位共鑒定出69個(gè)化合物,其中發(fā)現(xiàn)9個(gè)含氮化合物;對(duì)蠐螬堿性部位進(jìn)一步分離純化共得到14個(gè)化合物,分別是:膽甾醇(Cholesterol)、神經(jīng)酸(Cis-15-tetracosenoic acid)、反油酸(Elaidic acid)、9H-吡啶(3,4-b)吲哚(9H-pyrido(3,4-b)i

5、ndole)、1,2-環(huán)己二醇(1,2–Cyclohexanediol)、吡啶-3-甲酰胺（Pyridine-3-carboxamide)、十六碳烯酸（Hexadecenoic acid)、羥吲哚（Oxindole)、油酸（Oleic acid)、吲哚-3-醛(Indol-3-aldehyde)、油酸甲酯(Oil methyl ester)、2-哌啶酮(2-piperidone)、4-甲基-5-(β-羥乙基)噻唑(4-methyl-5-

6、(β-hydroxyethyl)thiazole)、5,10-二乙氧基-2,3,7,8-四氫化-1H,6H-聯(lián)吡咯[1,2-a:1',2'-d]吡嗪(5,10-Diethoxy-2,3,7,8-tetrahydro-1H,6H–dipyrrolo[1,2-a:1',2'-d]pyrazine),其中單體化合物神經(jīng)酸和吲哚-3-醛體內(nèi)、體外對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞有明顯抑制作用,體內(nèi)可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論:
　　從蠐螬堿性部