銀耳藥材指紋圖譜的研究.pdf

1、銀耳（Tremella fucifomisBerk），又稱白木耳，為真菌類銀耳科銀耳屬植物銀耳的子實(shí)體。銀耳多糖是銀耳藥材中的主要成分，近年來，對銀耳多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)及藥理活性方面的研究很多，早在上個世紀(jì)70年代就發(fā)現(xiàn)銀耳多糖具有提高機(jī)體免疫力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗?jié)?、增?qiáng)腫瘤患者對放、化療的耐受力及升高白細(xì)胞等作用。因此，銀耳在我國具有悠久的藥食兼用歷史。
　　中藥中的化學(xué)成分十分復(fù)雜，很難根據(jù)測定其中一個或幾個組分來確保

2、藥材或制劑的質(zhì)量，而近年來，中藥指紋圖譜技術(shù)的發(fā)展與利用，可以較全面地反映中藥所含化學(xué)成分的種類和數(shù)量，進(jìn)而作為中藥材和制劑的內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　本實(shí)驗(yàn)分別將十批不同來源的銀耳子實(shí)體剪碎，加入20倍量的水，煎煮兩次，每次6 h，合并兩次濾液，濃縮至一定體積，加五倍量乙醇沉淀，離心，沉淀冷凍干燥即得銀耳多糖。銀耳多糖通過薄層色譜法（TLC）、氣相色譜法（GC）和高效液相色譜法（HPLC）三種分析方法進(jìn)行組成糖的分析，最終確定柱前衍生

3、化高效液相色譜法是出峰最全、操作較簡單、分離效果好、重現(xiàn)性好的方法，且其分析結(jié)果具有指紋性，因此確定用柱前衍生化高效液相色譜法為制作指紋圖譜的最佳分析方法；實(shí)驗(yàn)中考察了不同衍生化溫度、衍生化時間、HCl中和的用量，最終確定最佳衍生化條件為衍生化溫度為70℃水浴，衍生化時間為加熱30min，HCl的用量為與NaOH加入量的比值為1:1；同時在確定高效液相色譜法為最優(yōu)分析方法后，對液相條件進(jìn)行考察，如不同色譜柱、柱溫、流動相、流速、檢測波長

4、、洗脫梯度和進(jìn)樣量等色譜條件，最終確定色譜條件為：色譜柱：Vertex AQ-C18分析柱；柱溫：40℃；流動相：A：磷酸鹽緩沖液（pH6.8）：乙腈（85：15，V/V）；B：磷酸鹽緩沖液（pH6.8）：乙腈（60：40，V/V）；流速：0.9mL/min；檢測波長：250 nm。梯度洗脫：時間梯度0 min→10 min→50 min，相應(yīng)的濃度梯度為8％(B)→16%(B)→40%(B)；進(jìn)樣體積10μL。
　　按照最佳條件

5、對十批不同購買地的銀耳藥材中銀耳多糖做指紋圖譜的分析與方法學(xué)考察，應(yīng)用FP-CASE相似度計算軟件（由湖南中南大學(xué)梁逸曾教授領(lǐng)銜開發(fā)，為藥典會認(rèn)可試用的兩個軟件之一），供試品指紋圖譜與隨行對照物指紋圖譜經(jīng)《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》計算，相似度均≥0.9。方法學(xué)考察結(jié)果顯示十批銀耳藥材中的銀耳多糖經(jīng)衍生化后24 h內(nèi)穩(wěn)定良好，精密度和重現(xiàn)性均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。
　　通過對十批銀耳藥材中銀耳多糖進(jìn)行指紋圖譜分析，為銀耳藥材質(zhì)量鑒別提供