雞蛋清中三種蛋白質(zhì)的連續(xù)化提取研究.pdf

1、研究雞蛋清中三種主要蛋白質(zhì)(卵白蛋白、溶菌酶和卵鐵傳遞蛋白)連續(xù)化提取的新方法。建立了包括水稀釋-微濾、超濾、鹽析以及離子交換為主要分離步驟的技術(shù)路線，實(shí)現(xiàn)了雞蛋清的綜合利用。 雞蛋清預(yù)處理工藝的優(yōu)化。對(duì)影響微濾液中蛋白質(zhì)含量及平均微濾速度的五個(gè)因素：稀釋倍數(shù)、pH、NaCl濃度、靜置時(shí)間和硅藻土添加量進(jìn)行考察。最后確定最佳工藝條件為：雞蛋清10倍水稀釋、pH9.0、NaCl濃度為0.075mol/L，充分低速攪拌，4℃下靜置至

2、少6h，添加硅藻土5g/100ml，微濾選用0.45μm、Φ50mm的混合纖維素酯微孔濾膜。經(jīng)此操作可顯著降低雞蛋清的粘度，加快微孔過濾速度，微濾平均速度為2ml/min。微濾液的澄清度較好，其中蛋白質(zhì)含量為8.97mg/ml，蛋白質(zhì)回收率為80.6％。 雞蛋清微濾液的濃縮采用超濾法，卵白蛋白的初步分離采用鹽析法。選擇截流分子量5KD的超濾膜、單段間歇式超濾，對(duì)微濾液濃縮3倍后，其中蛋白質(zhì)含量為21.86mg/ml；再用不同飽和

3、度的(NH4)2SO4進(jìn)行鹽析，初步分離卵白蛋白，最后確定NH4)2SO4飽和度為60％。卵白蛋白回收率為79.8％，電泳結(jié)果顯示卵白蛋白為主要條帶。 卵鐵傳遞蛋白和溶菌酶的分離選用了兩種陰離子樹脂進(jìn)行離子交換色譜試驗(yàn)。(1)DEAE-sepharoseF.F.離子交換柱，以0.01mol/L、pH值為8.0的Tris-HCl緩沖液平衡、上樣、流洗得到溶菌酶，然后，用含0.04mol/LNaCl的上述緩沖液洗去部分雜蛋白，再用含

4、NaCl0.06mol/L的緩沖液洗脫，得到了卵鐵傳遞蛋白；經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測(cè)，蛋白質(zhì)的純度較高；活性檢測(cè)，溶菌酶活力為：1000U/mgPr，卵鐵傳遞蛋白對(duì)大腸桿菌抑菌率為：27.3％；(2)Q-sepharoseF.F.離子交換柱，以0.01mol/L、pH值為8.5的Tris-HCl緩沖液平衡、上樣、流洗得到溶菌酶，之后，先用含0.08mol/LNaCl的上述緩沖液洗去部分雜蛋白，再用含NaCl0.10mol/L的緩沖液洗

5、脫，得到了卵鐵傳遞蛋白；經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測(cè)，蛋白質(zhì)的純度較高；活性檢測(cè)，溶菌酶活力為：1077U/mgPr，卵鐵傳遞蛋白對(duì)大腸桿菌抑菌率為：31.8％。上述試驗(yàn)結(jié)果顯示：選用DEAE-sepharoseF.F及Q-sepharoseF.F.陰離子交換樹脂均可實(shí)現(xiàn)對(duì)溶菌酶及卵鐵傳遞蛋白的分離提取。但Q-sepharoseF.F.離子交換樹脂在蛋白質(zhì)回收率、蛋白質(zhì)活性等方面均優(yōu)于DEAE-sepharoseF.F.離子交換樹脂。

6、 通過比較優(yōu)化了以水稀釋-微濾、超濾、鹽析以及離子交換為主要分離步驟的工藝流程，實(shí)現(xiàn)了雞蛋清中三種主要蛋白質(zhì)的連續(xù)化提取，整個(gè)分離過程沒有使用有機(jī)溶劑，其它化學(xué)試劑使用很少，方法簡(jiǎn)單、成本低。同時(shí)建立了一套快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)手段，即測(cè)定蛋白質(zhì)含量的Bradford法、判斷蛋白質(zhì)純度的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法以及檢測(cè)溶菌酶和卵鐵傳遞蛋白活性的舒加法、大腸桿菌抑菌試驗(yàn)，作為工藝監(jiān)控指標(biāo)。試驗(yàn)所得的三種蛋白質(zhì)均具有生物活性，特別是具有抗