參芍口服液對(duì)大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化的療效及其機(jī)制.pdf

1、目的:
　　 冠心?。╟oronaryarterydisease，CAD）作為一種常見的心血管系統(tǒng)疾病，是導(dǎo)致中老年死亡的首要原因，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為CAD的發(fā)病基礎(chǔ)為動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)，而AS是一種多因素參與的病理過(guò)程，其發(fā)病機(jī)制與血管內(nèi)皮損傷、脂質(zhì)的氧化與浸潤(rùn)、炎癥細(xì)胞滲透、免疫性細(xì)胞因子的表達(dá)、氧化損傷、血管平滑肌細(xì)胞增殖與凋亡失衡、鈣離子內(nèi)流升高致使平滑肌細(xì)胞(vascularsmoothmu

2、sclecells，VSMC)內(nèi)鈣超載等多個(gè)病理環(huán)節(jié)有關(guān)。上述機(jī)制在導(dǎo)致粥樣斑塊侵蝕和崩解的過(guò)程中起了關(guān)鍵作用，而針對(duì)這些病理環(huán)節(jié)進(jìn)行靶向治療有望成為防治AS的有效手段之一。
　　 參芍口服液是臨床上治療AS有效的中藥復(fù)方制劑，課題組前期研究顯示，參芍口服液能夠通過(guò)降低心肌梗死模型大鼠的血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1和E-選擇素的表達(dá)，減輕氧自由基過(guò)氧化損傷，保護(hù)心肌線粒體結(jié)構(gòu)及功能等多個(gè)途徑發(fā)揮心肌細(xì)胞保護(hù)作用，但其對(duì)心血管系統(tǒng)的保

3、護(hù)機(jī)制仍不確切，尤其是對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的療效和機(jī)制仍未所知。
　　 本研究分三部分，通過(guò)構(gòu)建大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化模型，并用參芍口服液進(jìn)行治療，觀察本方對(duì)大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化模型的療效，并在血脂水平、氧化應(yīng)激、炎癥因子表達(dá)這三個(gè)方面探討其作用機(jī)制，為本方的開發(fā)提供一定的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 50只SD大鼠隨機(jī)分為5組（每組10只），分組為:1）空白對(duì)照組;2)模型組:采用維生素D3腹腔注射+高脂飲食制

4、作動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠;3）參芍口服液低劑量治療組;4）參芍口服液高劑量治療組;5）辛伐他汀治療組?？瞻讓?duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)，模型組和治療組給予高脂飲食+VD360萬(wàn)IU/kg/d腹腔注射3天。4周后灌胃給藥，參芍口服液低、高劑量組分別按4ml/d、8ml/d給藥，辛伐他汀組按5mg/kg/d給藥，其余組給予生理鹽水灌胃處理，持續(xù)給藥8周后處死。股動(dòng)脈取血，采用直接測(cè)定法測(cè)定各組血清總膽固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三酯

5、(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇（Low-densitylipoproteincholesterol，LDL-C）;采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)測(cè)定各組血清中丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽過(guò)氧化酶(glutathioneperoxidase，GSH-PX);紫外分光法檢測(cè)過(guò)氧化氫酶(catalase，CAT)、超氧化物歧

6、化酶(superoxidedismutase，SOD)含量，觀察參芍口服液對(duì)氧化應(yīng)激損傷的影響;行HE染色觀察各組大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化病變程度;采用免疫組織化學(xué)染色法觀察細(xì)胞間粘附分子-1(Intercellularadhesionmolecule-1，ICAM-1)、血管細(xì)胞粘附分子-1(Vascularcelladhesionmolecule，VCAM-1)、白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)、白介素-17A(I

7、nterleukin-17A，IL-17A)、白介素-23(Interleukin-23，IL-23)和α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)在主動(dòng)脈上的表達(dá);采用Westernblot檢測(cè)主動(dòng)脈組織ICAM-1、VCAM-1、IL-1β、IL-17A、IL-23的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、參芍口服液對(duì)大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化病理形態(tài)的影響
　　 HE染色顯示，大鼠主動(dòng)脈粥樣硬

8、化模型組主動(dòng)脈管腔變窄，內(nèi)膜增厚，向管腔內(nèi)突起，內(nèi)膜下可見大量平滑肌細(xì)胞增殖，出現(xiàn)脂質(zhì)斑塊和泡沫細(xì)胞積聚，斑塊底部可見鈣質(zhì)沉積和泡沫細(xì)胞壞死區(qū)域。彈力纖維變性、崩解和斷裂，中膜萎縮，導(dǎo)致動(dòng)脈壁三層結(jié)構(gòu)紊亂。在內(nèi)膜和中膜可見較多的斑塊和炎細(xì)胞浸潤(rùn)。而在參芍口服液治療組，尤其是高劑量治療組，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊病變程度明顯減輕。
　　 2、參芍口服液對(duì)大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化模型血脂水平的影響
　　 與空白對(duì)照組相比，大鼠主動(dòng)脈粥樣硬

9、化模型血清中TC、TG、LDL-C含量明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而給予參芍口服液治療，能夠顯著降低大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化模型的血脂水平，且高劑量參芍口服液組低于低劑量參芍口服液組(P＜0.05)，陽(yáng)性藥物對(duì)照辛伐他汀治療組與模型組相比，血脂水平降低，高劑量參芍口服液組與辛伐他汀組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 3、參芍口服液對(duì)大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化模型氧化應(yīng)激水平的影響
　　 與空白對(duì)照組比較，

10、大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化模型組中血清MDA含量明顯升高，GSH-PX、CAT、SOD含量降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;予以參芍口服液或辛伐他汀能夠顯著抑制該變化。其中，高劑量參芍口服液組與辛伐他汀組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);高劑量參芍口服液組MDA含量低于低劑量參芍口服液組(P＜0.05)，GSH-PX、CAT、SOD含量高于低劑量參芍口服液組(P＜0.05)。
　　 4、參芍口服液對(duì)大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化模型炎

11、癥因子表達(dá)的調(diào)控作用
　　 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示，ICAM-1、VCAM-1、IL-1β、IL-17A和IL-23在大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化模型中主動(dòng)脈內(nèi)膜呈陽(yáng)性表達(dá)，而在正常對(duì)照組未見陽(yáng)性表達(dá)。而予以參芍口服液或辛伐他汀治療，ICAM-1、VCAM-1、IL-1β、IL-17A和IL-23陽(yáng)性顯色明顯減弱。
　　 采用Westernblot進(jìn)行定量分析，結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組主動(dòng)脈ICAM-1、VCAM-1、

12、IL1β、IL-17A、IL-23蛋白表達(dá)明顯增高，分別為空白對(duì)照組的3.07、2.92、2.42、3.21和2.34倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。予以高劑量參芍口服液抗動(dòng)脈粥樣硬化治療8周后，ICAM-1、VCAM-1、IIL1β、L-17A和IL-23明顯下調(diào)，分別是模型組的57.65％、52.05％、65.7％、59.5％和50.43％;低劑量參芍口服液治療組，分別下調(diào)為模型組的64.16％、71.92％、84.3％、