遲緩愛(ài)德華菌弱毒株的分離鑒定及對(duì)羅非魚(yú)的免疫保護(hù)效果研究.pdf

1、遲緩愛(ài)德華菌（Edwardsiella tarda）廣泛分布在自然界，尤以水中多見(jiàn)，對(duì)人和動(dòng)物具有一定的致病性。遲緩愛(ài)德華菌是危害水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的重要病原菌，該菌能感染魚(yú)類、貝類、兩棲類、爬行類等多種水生動(dòng)物，不同國(guó)家和地區(qū)都報(bào)道過(guò)由遲緩愛(ài)德華菌感染引發(fā)的病害，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前預(yù)防和治療愛(ài)德華菌病的主要方法仍是消毒劑、抗生素等，但由其引起的細(xì)菌耐藥性、食品藥物殘留等問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重。
　　本研究從革胡子鯰魚(yú)中分離到一

2、株細(xì)菌（TANX），并對(duì)其進(jìn)行鑒定與生物學(xué)特性分析。結(jié)果顯示，TANX菌株為遲緩愛(ài)德華菌，對(duì)健康羅非魚(yú)（Tilapia Mossambica）人工感染試驗(yàn)表明，該分離菌株的致病力非常弱，為天然弱毒株。用PCR方法檢測(cè)該菌株中遲緩愛(ài)德華菌6種常見(jiàn)毒力基因檸檬酸裂解酶（citC）、鞭毛蛋白（fimA）、谷氨酸脫羧酶同工酶（gadB）、過(guò)氧化氫酶（KatB）、殺傷因子（mukF）、TTSS基因（esrB）基因，發(fā)現(xiàn)TANX菌中只含有citC和

3、mukF兩種毒力基因，而強(qiáng)毒株含有citC、fimA、gadB、KatB、mukF、esrB。fimA基因起黏附、入侵宿主細(xì)胞的功能;gadB、katB、esrB基因使遲鈍愛(ài)德華氏菌能在宿主細(xì)胞內(nèi)存活并超越宿主的防御屏障(依賴血清和巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷作用)，TANX菌株不含這些毒力基因，致病力較弱。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示TANX菌株對(duì)頭孢呋辛、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、氧氟沙星、左氟沙星等藥物敏感，對(duì)青霉素G、氨芐西林、四環(huán)素、多

4、粘菌素B等藥物耐受。為了研究遲緩愛(ài)德華菌弱毒疫苗對(duì)羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus）免疫保護(hù)效果，本試驗(yàn)制備了遲緩愛(ài)德華菌弱毒疫苗（LAV）和福爾馬林強(qiáng)毒株滅活疫苗(FKC)，利用腹腔注射、口服兩種途徑免疫羅非魚(yú)，定期采集各組羅非魚(yú)的頭腎和脾臟以及血清，檢測(cè)各組抗體水平，血清中SOD（超氧化物歧化酶）、AKP（堿性磷酸酶）、ACP（酸性磷酸酶）的活性，檢測(cè)頭腎、脾臟中干擾素IFN、白介素IL-1、腫瘤壞死因子TNF、C

5、aspase3的相對(duì)表達(dá)量；最后對(duì)各組羅非魚(yú)進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，計(jì)算各組的相對(duì)免疫保護(hù)率。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組抗體水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），弱毒疫苗(LAV)組抗體水平高于滅活疫苗(FKC)組，差異不顯著，免疫后3周和4周，LAV注射組的抗體水平顯著高于FKC組（P＜0.05）；酶活力檢測(cè)結(jié)果顯示，LAV組的ACP、AKP活力差異不顯著，F(xiàn)KC注射組的SOD活力顯著高于對(duì)照組和FKC口服組（P＜0.05）；熒光定量檢測(cè)結(jié)果表明，免疫28

6、天，IFN在頭腎中的表達(dá)量LAV組明顯高于FKC組（P＜0.01），而FKC組IL-1在頭腎中的表達(dá)量明顯高于LAV組（P＜0.01），LAV組頭腎中IFN、TNF、Caspase3的表達(dá)量和脾臟中Caspase3的表達(dá)量高于FKC組，均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；免疫保護(hù)率結(jié)果表明，LAV注射、口服組的相對(duì)保護(hù)率分別為90.5％、63.6%，F(xiàn)KC注射、口服組的相對(duì)保護(hù)率分別為76.1%、59%，免疫保護(hù)率均顯著高于對(duì)照組（P＜0