酶法和氣相色譜法測(cè)定苦馬豆素含量的研究.pdf

1、瘋草是豆科黃芪屬和棘豆屬有毒植物的總稱(chēng)，也是世界范圍內(nèi)危害草原畜牧業(yè)最嚴(yán)重的一類(lèi)毒草。在我國(guó)，瘋草廣泛分布于西北、華北和西南的廣大草原，危害面積達(dá)1100萬(wàn)hm2。苦馬豆素是瘋草主要毒性成分之一。隨著對(duì)瘋草化學(xué)成分以及防除利用等方面研究的深入，需要改進(jìn)苦馬豆素現(xiàn)有提取方法，提取大量的苦馬豆素，同時(shí)需要對(duì)苦馬豆素的微量定量檢測(cè)方法進(jìn)行研究，以滿(mǎn)足進(jìn)一步對(duì)動(dòng)物中毒機(jī)理以及防制措施研究的需要。本研究首先對(duì)40 Knz的超聲波提取方法做了改進(jìn)，

2、提高瘋草中苦馬豆素的提取效率。建立了苦馬豆素氣相色譜內(nèi)標(biāo)法定量檢測(cè)方法，優(yōu)化了a-甘露糖苷酶法，使苦馬豆素微量定量檢測(cè)方法更實(shí)用，更容易操作。 1.將變異黃芪草粉1.0 kg加水，用40 Knz超聲波清洗器處理。水提液濃縮除雜后，先用正丁醇萃取除雜，下部水提濃縮液用堿性正丁醇萃取，后用稀酸水萃取。濃縮后的稀酸水萃取液用氨性氯仿萃取，濃縮萃取液成浸膏，此浸膏經(jīng)石蠟油浴升華得到水提液濃縮28mg白色晶體，初步鑒定為苦馬豆素，提取率為

3、28 mg/kg。 2.在檢測(cè)器溫度280μ，進(jìn)樣口溫度300℃，柱溫溫度230℃。分流比為60:1；載氣為高純氮?dú)?；載氣壓力為200 kPa，進(jìn)樣量：1uL的色譜條件下，用甲基-a-D-NE喃甘露糖苷(me-Ga1)為內(nèi)標(biāo)，進(jìn)行氣相色譜分析，以SW進(jìn)樣質(zhì)量濃度Y對(duì)SW和me-Ga1峰面積比值X進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：Y=0.198 3X-0.069 5，r=0.999 4，表明SW進(jìn)樣質(zhì)量濃度(O.047～6 mg/mL)對(duì)

4、SW和me-Gal峰面積比值線性關(guān)系良好，對(duì)于瘋草樣品利用超聲波協(xié)助提取法和732陽(yáng)離子樹(shù)脂法處理，通過(guò)對(duì)其結(jié)果分析能發(fā)現(xiàn)超聲波協(xié)助提取法對(duì)與苦馬豆素的提取過(guò)程損失少。 3.每個(gè)微孔中依次加100μL檸檬酸鹽緩沖溶液，20μ a-甘露糖苷酶稀釋液，20μL待檢測(cè)的溶液后，37℃孵育15 min，每個(gè)微孔中加20μL對(duì)硝基苯基-a-D-甘露糖苷溶液，37μ孵育90 min后在405 nm濾光片下測(cè)吸光度，以SW濃度Y對(duì)其吸光度X(