姜黃素納米粒防治糖尿病視網(wǎng)膜病變研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文姜黃素納米粒防治糖尿病視網(wǎng)膜病變研究姓名：鄭海生申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：藍(lán)育青20100520中山大學(xué)碩士學(xué)位論文姜黃素納米粒防治糖尿病視網(wǎng)膜病變研究染料FITC的ChitDC及Cur／ChitDC與hRPE細(xì)胞的相互作用：負(fù)載熒光染料FITC的ChitDC及Cur／Chit—DC作用于hRPE細(xì)胞24h后，倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察避光培養(yǎng)1、3、5天后ChitDC及Cur／ChitDC與hRPE細(xì)胞的相

2、互關(guān)系。4CCK8LL色法評(píng)價(jià)ChitDC對(duì)hRPE細(xì)胞的增殖影響：CCK8法檢測(cè)不同劑量(5、10、20、40“rdml)ChitDC在不同時(shí)間點(diǎn)(24h、48h)對(duì)hRPE細(xì)胞的增殖影響，評(píng)價(jià)Chit—DC的生物安全性。5CCK8法檢測(cè)不同劑量(5、10、20、40pg／r111)Cur／ChitDC和Cur在不同時(shí)間點(diǎn)(1、2、3、4、5、6d)對(duì)hRPE細(xì)胞的增殖影響。6流式細(xì)胞儀測(cè)定Cur／chit—DC及Cur對(duì)hRPE細(xì)胞

3、周期時(shí)相變化。7半定量RTPCR分別檢測(cè)劑量為10pg／ml的Cur、ChitDC和Cur／Chit—DC作用hRPE細(xì)胞24h后細(xì)胞VEGFmRNA的表達(dá)水平。結(jié)果：1通過(guò)將Cur與ChitDC混合制成負(fù)載藥的殼聚糖衍生物納米粒為淡黃色；藥物從納米粒中的釋放在96h后達(dá)到平衡，累積釋放藥物量為316％。2體外成功培養(yǎng)hRPE細(xì)胞，胞體為不規(guī)則多角形，胞內(nèi)含黑色素顆粒，中央有一圓形透明區(qū)為細(xì)胞核；隨著傳代次數(shù)的增加，胞漿內(nèi)的黑色素顆粒逐

4、漸減少，當(dāng)傳至第56代時(shí)胞漿內(nèi)的黑色素顆?；鞠?，形狀類(lèi)似成纖維細(xì)胞。經(jīng)免疫化學(xué)角蛋白單克隆抗體鑒定呈陽(yáng)性。3不同濃度的Chit—DC納米粒作用于hRPE細(xì)胞24h、48h后與對(duì)照組(藥物濃度為0mg／L)OD值的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO05)。提示載藥材料ChitDC對(duì)hRPE細(xì)胞無(wú)毒性、安全性良好。4負(fù)載熒光染料FITC的ChitDC與hRPE細(xì)胞作用1天后，ChitDC納米粒大部分仍位于近細(xì)胞膜的部位(可能在細(xì)胞膜表面，也可能在細(xì)

5、胞質(zhì)中)；第3天，納米粒逐漸向細(xì)胞核會(huì)聚，且大部分位于細(xì)胞核周?chē)?；?天，可看到ChitDC納米粒已進(jìn)入細(xì)胞核，且納米?？赡茉诩?xì)胞內(nèi)溶酶體的作用下有部分降解，因此，熒光染料擴(kuò)散到整個(gè)細(xì)胞中，在熒光圖中可看到細(xì)胞的輪廓，且細(xì)胞核區(qū)域的熒光較強(qiáng)。即隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，納米粒由細(xì)胞外進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)并逐漸地降解。Cur／ChitDC和細(xì)胞作用的關(guān)系與ChitDC大致相同。5Cur／ChitDC納米粒與Cur原藥對(duì)體外培養(yǎng)的hRPE細(xì)胞的增生抑制率存在U