NR2B在骨癌痛小鼠的前扣帶回和脊髓中的分布與表達(dá).pdf

1、目的:
　　 觀察骨癌痛小鼠前扣帶回(ACC)和脊髓中的N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸(NMDA)受體2B亞基(NR2B)表達(dá)含量的變化及分布情況。
　　 方法:
　　 選用體重約14-18g的成年雄性C57BL/6小鼠81只,隨機(jī)分為三組,癌痛組(27只);假手術(shù)組(27只);正常對(duì)照組(27只)。癌痛組接種Lewis肺癌細(xì)胞約2×106個(gè);假手術(shù)組接種等容積的d-hanks液;接種容積均為10ul。正常對(duì)照組不予任

2、何處理。選擇術(shù)后第6、10、14、18、22天,分別觀察3組小鼠自發(fā)痛行為及測(cè)定機(jī)械性觸誘發(fā)痛。癌痛組、假手術(shù)組和正常對(duì)照組分別于術(shù)后第6、10、14、18、22天各取3只,取前扣帶回和L4-L6段脊髓用于做實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)NR2B的表達(dá)。癌痛組、假手術(shù)組和正常對(duì)照組分別于術(shù)后第14、18天各取3只,取腦和脊髓做免疫組化檢測(cè)NR2B的表達(dá);同時(shí)每組于術(shù)后第14、18天各取3只,取脊髓做Western blot檢測(cè)NR2B的表達(dá)。

3、>　　 結(jié)果:
　　 1)癌痛組在術(shù)后第6天,術(shù)側(cè)后肢有抬足行為,術(shù)后第10天左右自發(fā)抬足行為明顯,且抬足時(shí)間在觀察期內(nèi)逐次延長(zhǎng),術(shù)后第10、14、18、22天觀察到的抬足時(shí)間與對(duì)照組和假手術(shù)組相比均有顯著差異(P＜0.05)。癌痛組于術(shù)后第10天左右出現(xiàn)觸誘發(fā)痛,第14天左右觸誘發(fā)痛明顯并持續(xù)至整個(gè)觀察期;癌痛組觀察期內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比,差異顯著(P＜0.05)。
　　 2)L4-L6段脊髓和前扣帶回NR2B的實(shí)

4、時(shí)定量PCR示:癌痛組于術(shù)后第6天、10天,L4-L6段脊髓和前扣帶回NR2B的表達(dá)與正常組和假手術(shù)組比較均無(wú)顯著差異。癌痛組于術(shù)后第14天、18天,脊髓和前扣帶回NR2B的表達(dá)明顯增高,與正常組比較,有顯著差異(P＜0.05);而假手術(shù)組與正常組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。且于術(shù)后第22天,癌痛組前扣帶回NR2B的表達(dá)含量下降,與假手術(shù)組和正常組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3)L4-L6段脊髓和前扣帶回NR2B免疫組化測(cè)定

5、結(jié)果:癌痛組NR2B主要分布在脊髓背角淺層、中央導(dǎo)水管、前角以及小鼠的前扣帶回,脊髓各層NR2B表達(dá)量依次為前角、背角淺層、中央導(dǎo)水管。癌痛組于術(shù)后第14、18天,脊髓和手術(shù)對(duì)側(cè)的前扣帶回區(qū)NR2B陽(yáng)性細(xì)胞光密度(OD)值與假手術(shù)組和正常組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。假手術(shù)組與正常組比較,NR2B陽(yáng)性細(xì)胞光密度(OD)值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 4)L4-L6段脊髓NR2B表達(dá)的Western blot檢測(cè)結(jié)果

6、:
　　 癌痛組于術(shù)后第14天、18天,脊髓NR2B的表達(dá)明顯增高,與正常組比較,有顯著差異(P＜0.05);而假手術(shù)組與正常組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1)骨癌痛組脊髓和前扣帶回中的NR2B含量表達(dá)上調(diào),且同時(shí)疼痛行為學(xué)也有相應(yīng)的改變;
　　 2)在同一癌痛模型中觀察到NR2B在脊髓和前扣帶回同時(shí)高表達(dá),提示在癌痛的產(chǎn)生和維持中不僅激活了脊髓低位中樞,而且有腦部中樞的參與;