異源多倍體泥鰍的誘導(dǎo)及其育性初步研究.pdf

1、泥鰍（Misgurnus anguiUicaudatus）和大鱗副泥鰍(Paramisgurnus dabryanus)分別隸屬于鰍科(Cobitidac)、花鰍亞科(Cobitinae)中的泥鰍屬（Misgurnus）和副泥鰍屬（Paramisgurnus），是我國兩種重要的淡水經(jīng)濟(jì)魚類。泥鰍以其多樣的倍性組成和復(fù)雜的配子形成機(jī)制，成為魚類多倍體起源和進(jìn)化研究的良好材料。本研究以二倍體泥鰍(DD)、四倍體泥鰍(TT)和大鱗副泥鰍(PP

2、)為材料，開展異源多倍體泥鰍的誘導(dǎo)，對其生長、性腺發(fā)育以及配子育性進(jìn)行相關(guān)研究，現(xiàn)將主要結(jié)果匯報(bào)如下:
　　1、異源多倍體泥鰍的誘導(dǎo)和受精細(xì)胞學(xué)觀察
　　本研究采用冷休克方式開展了6種異源多倍體泥鰍(DD×PP-0，DD×DD-0，DD×TT-0，TT×PP-0，TT×DD-0和TT×TT-0。母本在前，父本在后。0代表抑制受精卵第二極體釋放誘導(dǎo)三倍型后代）的誘導(dǎo)。冷休克條件為:受精后5 min開始，2～3℃冰水冷休克處理3

3、0min。對不同生長階段誘導(dǎo)多倍體后代進(jìn)行倍性鑒定。1月齡，6種冷休克誘導(dǎo)多倍體成功率分別為87.50％(DD×PP-0)，53.85％(DD×DD-0)，90.91％(DD×TT-0),84.96％(TT×PP-0),76.92％(TT×DD-0),12.5％(TT×TT-0);12月齡，誘導(dǎo)多倍體后代倍性組成與1月齡相似。誘導(dǎo)成功率隨后代倍性增加而降低。熒光受精細(xì)胞學(xué)觀察結(jié)果證實(shí)冷休克通過抑制受精卵第二極體的釋放獲得三倍體后代。

4、r>　　2、異源多倍體泥鰍生長和性腺發(fā)育比較研究
　　對不同誘導(dǎo)多倍體后代進(jìn)行生長統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)早期生活史階段不同誘導(dǎo)組合后代生長差異不顯著，后期不同誘導(dǎo)組合后代生長差異顯著。12月齡，以四倍體泥鰍為母本大鱗副泥鰍為父本的誘導(dǎo)多倍體后代(TT×PP-0)生長最快。同一誘導(dǎo)組合中，誘導(dǎo)成功后代與未誘導(dǎo)成功后代生長差異較小，除TT×DD-0組合中五倍體后代較三倍體后代生長慢。同時(shí)，不同誘導(dǎo)后代性腺發(fā)育和性腺組織細(xì)胞倍性組成存在較大差異

5、。三倍體DD×PP-0卵巢主要包含2N和3N次級卵母細(xì)胞，精巢主要包含2.5N次級精母細(xì)胞和5N初級精母細(xì)胞;三倍體DD×DD-0卵巢主要包含2N次級卵母細(xì)胞和4N初級卵母細(xì)胞，精巢主要包含3N次級精母細(xì)胞和6N初級精母細(xì)胞;四倍體DD×TT-0卵巢主要包含2N次級卵母細(xì)胞和4N初級卵母細(xì)胞，精巢主要包含1N精細(xì)胞和2N次級精母細(xì)胞;五倍體TT×PP-0卵巢主要包含4N次級卵母細(xì)胞，精巢主要包含3N精細(xì)胞和6N次級精母細(xì)胞;五倍體TT×

6、DD-0卵巢主要包含4N次級卵母細(xì)胞，精巢主要包含2.5N精細(xì)胞和5N次級精母細(xì)胞;六倍體TT×TT-0卵巢主要包含6N次級卵母細(xì)胞。誘導(dǎo)多倍體后代性腺組織細(xì)胞倍性組成與正常減數(shù)分裂結(jié)果不盡相同，推測其非正常配子形成機(jī)制主要包括:單價(jià)體丟失，非同源染色體配對分裂等方式。
　　3、異源多倍體泥鰍的育性研究
　　以異源三倍體泥鰍(DD×PP-0)和異源五倍體泥鰍(TT×PP-0)為材料，開展異源多倍體泥鰍育性相關(guān)研究。異源三倍體

7、泥鰍和異源五倍體泥鰍卵巢發(fā)育良好，配子倍性組成簡單，但與體細(xì)胞倍性不同，存在少量可育成熟卵子;精巢發(fā)育遲緩，多停留在精原細(xì)胞期，配子倍性組成復(fù)雜，與體細(xì)胞倍性組成亦不同，不可育;異源三倍體泥鰍雌性主要產(chǎn)生1N成熟卵子。異源五倍體泥鰍產(chǎn)生多種不同倍性配子，以2N卵子為主，同時(shí)產(chǎn)生少量3N成熟卵子和非整數(shù)倍性成熟卵子。同時(shí)，冷休克誘導(dǎo)結(jié)果證實(shí)異源五倍體后代成熟卵子第二次減數(shù)分裂可產(chǎn)生2N極體。
　　4、三類四倍體泥鰍雌核發(fā)育特性研究<

8、br>　　對野生四倍體泥鰍(N-TT)、自繁四倍體泥鰍(A-TT)以及人工誘導(dǎo)四倍體泥鰍(M-TT)開展雌核發(fā)育相關(guān)研究，用團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala）滅活精子刺激四倍體泥鰍卵子發(fā)育，受精卵不進(jìn)行染色體加倍處理。三類四倍體泥鰍雌核發(fā)育后代幼魚階段均檢測到二倍體和四倍體后代，四倍體后代比例約占11.20～13.34％。四倍體雌核發(fā)育后代可存活至成魚。根據(jù)四倍體后代父本遺傳物質(zhì)分析以及微衛(wèi)星基因分型結(jié)果推測這種