棉花黃萎菌拮抗枯草芽孢桿菌NCD-2抑菌物質(zhì)的分離及性質(zhì)分析.pdf

1、枯草芽孢桿菌NCD-2是從根際土壤中分離篩選到的一株對(duì)棉花黃萎病病原菌具有較強(qiáng)抑制作用的菌株，并對(duì)棉花黃萎病表現(xiàn)出較理想的防治效果。 通過對(duì)NCD-2菌株培養(yǎng)條件(培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間和pH值)的研究，得到了抗菌物質(zhì)產(chǎn)生的最佳條件為:在NB液體培養(yǎng)基中、30℃、pH=7、搖床培養(yǎng)(180rpm)2d，所得發(fā)酵液對(duì)棉花黃萎病菌的抑制作用最強(qiáng)。 通過對(duì)最佳條件下獲得的NCD-2菌株培養(yǎng)液進(jìn)行硫酸銨沉淀(30％～80％)

2、，并用14000D透析袋透析獲得對(duì)棉花黃萎菌有抑制作用的蛋白粗提液。通過RNA酶，蛋白酶K和胰蛋白酶分別對(duì)該蛋白粗提液處理發(fā)現(xiàn)，經(jīng)RNA酶處理后蛋白液的抑菌活性與對(duì)照相比差異不顯著，經(jīng)蛋白酶K和胰蛋白酶處理后蛋白粗提液的抑菌活性與對(duì)照相比顯著降低；蛋白粗提液經(jīng)熱(60℃、80℃、100℃、120℃)處理30 min，結(jié)果表明經(jīng)60℃處理后的抑菌活性與對(duì)照相比差異不顯著，經(jīng)80℃、100℃、120℃處理后抑菌活性與對(duì)照相比顯著下降，但經(jīng)1

3、20℃處理30 min后仍有一部分抑菌活性。因此初步說明抑菌菌物質(zhì)含有不耐熱蛋白類物質(zhì)。 本文對(duì)30％～80％飽和硫酸銨沉淀的蛋白粗提液進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，以確定抑菌物質(zhì)的成分，即30％～80％硫酸銨沉淀的蛋白粗提液經(jīng)DEAE-Sepharose Fast Flow柱層析得到3個(gè)組分，其中第二組分有抑菌活性，該組分通過Sephacry S-100凝膠過濾分離得到3個(gè)組分S-1、S-2和S-3，其中S-1和S-3兩個(gè)組分經(jīng)活性檢測

4、為抑菌組分，經(jīng)RPC分析已達(dá)到分離純。 本文對(duì)小分子的脂肽類抑菌物質(zhì)也進(jìn)行了簡單的分析，以確定小分子脂肽類抑菌物質(zhì)的成分，即濃鹽酸沉淀的脂肽類抗生素粗提液與標(biāo)準(zhǔn)品Surfactin、IturinA進(jìn)行HPLC比較分析，結(jié)果表明NCD-2菌株的抑菌活性物質(zhì)由多種成分構(gòu)成，其中含有與IturinA相似的成分，進(jìn)一步采用了ESI-MS對(duì)NCD-2菌株胞外抑菌物質(zhì)粗提液與標(biāo)準(zhǔn)品Surfactin、IturinA進(jìn)一步比較分析，發(fā)現(xiàn)NCD