激素受體與子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)病的分子機制研究.pdf

1、目的：檢測雌、孕激素受體不同表達狀態(tài)子宮內(nèi)膜樣腺癌的基因表達譜特征及雌、孕激素受體作用的相關(guān)基因改變，探討雌、孕激素受體在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)病中的作用并為特異性的靶向治療提供理論基礎(chǔ)。 方法：(1)采用人17kcDNA表達譜芯片，抽取ER(+)PR(+)；ER(-)PR(-)；ER(+)PR(-)子宮內(nèi)膜樣腺癌組織及正常子宮內(nèi)膜組織RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA分別進行芯片雜交實驗，篩選比值大于、等于2或等于、小于-2的差異表達基因并

2、進行差異基因功能分類；(2)通過生物信息學(xué)分析、篩選不同雌、孕激素受體子宮內(nèi)膜樣腺癌差異基因表達譜、凋亡信號通路及雌、孕激素受體調(diào)節(jié)相關(guān)基因；(3)RT-PCR、免疫組化驗證部分基因。 結(jié)果：(1)ER(+)PR(+)；ER(-)PR(-)；ER(+)PR(-)子宮內(nèi)膜樣腺癌分別與正常子宮內(nèi)膜比較，差異表達基因各有1653個、1756個、2215個；其中上、下調(diào)基因分別有902個、751個；907個、849個；1029個、118

3、6個；基因功能分類主要有：細胞結(jié)合、凋亡、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞周期、轉(zhuǎn)錄子激活等16類。(2)ER(+)PR(+)；ER(-)PR(-)；ER(+)PR(-)子宮內(nèi)膜樣腺癌特異性差異表達基因各有571個、645個、1125個；上、下調(diào)基因分別有399個、172個；443個、202個；608個、517個。(3)雌激素受體相關(guān)差異表達基因1177個，其中上調(diào)493個，下調(diào)684個；上調(diào)的基因功能分類主要為細胞有絲分裂、胚胎發(fā)育及形態(tài)、免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)

4、、糖代謝、DNA復(fù)制調(diào)節(jié)等31類；下調(diào)的基因類別為：T細胞增殖、血管形成、細胞遷移、細胞粘附、創(chuàng)傷反應(yīng)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等共27類。孕激素受體相關(guān)的差異表達基因1413個，其中上調(diào)814個，下調(diào)549個；上調(diào)基因功能類別主要有巨噬細胞激活、病毒防御反應(yīng)、肽及酪氨酸磷酸化正調(diào)節(jié)、氨基酸代謝調(diào)節(jié)、抗原遞呈與處理等73類；下調(diào)基因類別主要有翻譯、生物合成、大分子代謝3類。雌、孕激素受體相關(guān)的差異表達基因838個，其中上調(diào)466個，下調(diào)372個；雌、孕

5、激素受體相關(guān)的上調(diào)基因類別主要有：淋巴細胞負調(diào)節(jié)、B細胞增殖、多肽抗原遞呈與處理、補體經(jīng)典途徑、體液免疫反應(yīng)、抗原遞呈等65類；下調(diào)的基因類別有：氣體運輸、分泌、消化等4類。(4)ER(+)PR(+)；ER(-)PR(-)；ER(+)PR(-)子宮內(nèi)膜樣腺癌在經(jīng)典凋亡信號通道中差異表達基因分別是：BIRC3、TNFSF10、NFκBIA；PDCD8、BIRC3、PRKACB、NFκBIA、PIK3R1、PIK3R3；ER(+)PR(-)

6、TP53、PDCD8、BIRC3、CASP7、NFκBIA、CHUK、PIK3CD、PIK3R1、PIK3R3、IL3RA、ILlA。(5)RT-PCR實驗：INHBA在正常內(nèi)膜組為26.37±15.35；在ER(+)PR(+)、ER(-)PR(-)、ER(+)PR(-)內(nèi)膜癌組分別為117.68±44.15，45.96±29.02，37.14±31.03，分別與正常組比較，結(jié)果除與ER(+)PR(+)內(nèi)膜癌組有顯著差異外(P<0.05

7、)，余均無顯著差異(P>0.05)。FYN在正常內(nèi)膜組為83.24±32.30；在ER(+)PR(+)、ER(-)PR(-)、ER(+)PR(-)內(nèi)膜癌分別為48.01±38.29，18.01±19.67，20.46±16.51與正常內(nèi)膜組比較，結(jié)果除與ER(+)PR(+)內(nèi)膜癌組無明顯差異(P>0.05)外，余兩組差異顯著(P<0.05)。Cyr61在正常內(nèi)膜組織為102.63±34.83，在內(nèi)膜癌ER(+)PR(+)、ER(-)PR

8、(-)、ER(+)PR(-)組分別為25.28±28.99、55.35±44.82，10.23±11.06與正常內(nèi)膜組比較，結(jié)果除與ER(-)PR(-)內(nèi)膜癌組無明顯差異(P>0.05)外，余兩組差異顯著(P<0.05)。(6)免疫組化：Cyr61蛋白定位于細胞膜、細胞漿，陽性表達為淡黃到棕褐色不等；Cyr61在正常組織的表達為5.10±2.64，在內(nèi)膜癌手術(shù)-病理分期I、II、Ⅲ期分別為3.38±1.69、3.25±1.96、1.60

9、±1.35。組間兩兩比較除內(nèi)膜癌I期與II期間無顯著差異外(P>0.05)，余組間均差異明顯(P<0.05)：將Cyr61在不同組織學(xué)分級比較，G1為3.55±1.53，G2為3.30±1.71均高于G3的1.82±1.17(P<0.05)，但內(nèi)膜癌G1與G2級間無明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論：(1)多基因表達的變化參與了子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)??；(2)不同類型激素受體內(nèi)膜癌不同的差異基因表達譜及凋亡信號通路是其預(yù)后差別的分子基